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目的:以Ⅰ型血红素氧合酶(hemeoxygenase-1, HO-1)代谢产物一氧化碳(carbon monoxide,CO)为研究对象,探讨其对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的保护作用及潜在机制,为天然植物化学物在酒精性肝病的营养防治方面的应用提供理论和实验依据。方法:1.两步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,并建立大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤模型(100 mmol/L无水乙醇染毒大鼠肝细胞24 h)。2.大鼠原代肝细胞在乙醇孵育的同时,加入Hemin(20μmol/L)或者槲皮素(100μmol/L)与Hb(Hemoglobin,100μmol/L)共同作用,用酶学及生化学方法分析细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)活性及细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,以评价细胞的氧化损伤程度,确定槲皮素诱导的HO-1对酒精性肝细胞氧化损伤的保护作用。3.在以上研究基础上,对乙醇染毒的肝细胞,直接加入不同剂量的CO释放分子(CORM-2,5～50μmol/L)或在Hemin、槲皮素诱导HO-1的同时加入ZnPPⅨ抑制HO-1活性后再加入不同剂量的CORM-2,检测细胞微粒体内CYP2E1的活性,评价细胞的氧化损伤程度,同时以灭活的CORM-2(iCORM)取代CORM处理的肝细胞、单纯的Hemin、槲皮素及二烯丙基二硫化物(DADS,20μmol/L,CYP2E1抑制剂)处理的乙醇染毒肝细胞作为对照,并结合前面的研究结果,探讨CO对酒精性氧化损伤的保护作用,分析CO对CYP2E1活性及其依赖的酒精性氧化毒性的潜在抑制效应。结果:1.大鼠原代肝细胞经100 mmol酒精孵育24 h后,LDH、AST活性及MDA水平较正常对照组显著升高,GSH含量与正常对照组相比则明显降低。2.在乙醇孵育的同时,加入100μmol/L的槲皮素后,乙醇诱导的GSH消耗与MDA升高程度明显下降,而AST与MDA的释放也明显减轻;血红素(20μmol/L)在诱导HO-1的同时,也部分抑制了乙醇所致的肝细胞GSH消耗与AST释放;而Hb(Hemoglobin,100μmol/L)在抑制槲皮素和乙醇对HO-1的联合诱导活性的同时,不仅使槲皮素的保护效应完全丧失,反而进一步加重了乙醇所致的脂质过氧化及AST与LDH的释放。3.在乙醇孵育的同时,加入不同剂量的CO释放分子(CORM-2,5～50μmol/L)后,乙醇诱导的GSH消耗与MDA升高程度明显下降,而AST与MDA的释放也明显减轻,并且这种保护作用具有剂量依赖性的特点(在20μmol/L以内);而加入iCORM与乙醇共孵育则观察不到这种保护作用。4.乙醇孵育导致细胞CYP2E1活性显著升高,而DADS(20μmol/L,CYP2E1抑制剂)可以一定程度减轻细胞的酒精性氧化损伤;槲皮素、血红素及CORM都能有效抑制CYP2E1的活性,血红蛋白与锌原卟啉则消除了槲皮素的这种抑制效应,同时进一步使酒精依赖的CYP2E1的活性升高;锌原卟啉亦削弱了CORM对CYP2E1活性的抑制性;槲皮素、CORM、锌原卟啉与酒精共同孵育,CYP2E1活性与正常组相比仍然是下降的,而用iCORM取代CORM未能表现任何影响效应。结论:1.槲皮素通过诱导血红素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)对肝细胞酒精性氧化损伤产生保护作用。2. HO-1的代谢产物-CO对肝细胞酒精性氧化损伤具有保护作用,外源性CO也能模拟这一保护作用。这种保护效应可能与抑制CYP2E1活性有关。