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第一部分人腺样囊性癌耐药细胞株ACC-M/DDP的诱导建立目的:针对目前在头颈部肿瘤在化疗中产生的耐药性问题,建立人腺样囊性癌耐药细胞株ACC-M/DDP并研究其生物学特性,为腺样囊性癌的临床治疗提供实验依据。方法:以腺样囊性癌细胞株ACC-M为诱导对象,顺铂为诱导药物,采用大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法建立了在1μg/ ml顺铂作用下生长良好的耐药细胞株ACC-M/DDP;MTT法检测ACC-M/DDP细胞及亲代细胞对不同化疗药物敏感性,细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞术测定细胞周期。结果:成功诱导建立了人腺样囊性癌多药耐药细胞株ACC-M/DDP;MTT药物敏感性检测结果表明其对CDDP、Taxol、5-FU和CTX有不同程度的耐受性,其耐药指数分别为7.26、3.32、4.18和4.82。细胞计数法显示ACC-M和ACC-M/DDP细胞的倍增时间分别为21.3和28.7小时,流式细胞仪显示耐药细胞ACC-M/DDP与ACC-M相比S期明显增多(P<0.05)。结论:所获得的耐药细胞株ACC-M/DDP细胞性状稳定,是可靠的人腺样囊性癌多药耐药细胞模型,与亲本细胞ACC-M相比生物学特性有明显差异。可用于腺样囊性癌多药耐药机制的研究。第二部分MDR1基因在人腺样囊性癌多药耐药细胞株ACC-M/DDP中的表达及临床意义目的:探讨MDR1基因在人腺样囊性癌多药耐药细胞株ACC-M/DDP中的表达及临床意义,为研究肿瘤的多药耐药性及其逆转剂提供理论依据。方法:流式细胞术测定荧光药物罗丹明123在ACC-M和ACC-M/DDP细胞中的蓄积,RT-PCR检测细胞内MDR1 mRNA的表达,建立裸鼠腮腺移植瘤模型,免疫组化法检测移植瘤模型中P-gp表达情况。结果:罗丹明123结果显示耐药细胞ACC-M/DDP和亲本细胞ACC-M细胞内相对荧光强度分别为1.4±0.2和38.9±0.4 (P<0.01),RT-PCR结果显示MDR1基因在ACC-M细胞不表达,而在ACC-M/DDP细胞耐药细胞呈高表达。ACC-M组、ACC-M /DDP细胞组裸鼠移植瘤出现时间分别为( 8. 00±1. 76) d、( 14. 17±1.17) d,耐药组瘤体生长速度缓慢,浸润性降低。免疫组化结果P-gp在ACC-M/DDP中强表达而在ACC-M中未表达。结论:由顺铂诱导筛选的腺样囊性癌ACC-M/DDP细胞株产生的多药耐药性与MDR1/P-gp表达密切相关,其在裸鼠体内可以保持稳定的耐药性,但是浸润性降低。本研究为采用MDR1逆转剂提高腺样囊性癌化疗敏感性提供了理论依据。第三部分Survivin在介导腺样囊性癌细胞多药耐药性的产生及凋亡过程中的作用目的:观察紫杉醇对腺样囊性癌亲本细胞株ACC-2、肺高转移细胞株ACC-M、顺铂耐药细胞株ACC-M/DDP的生物学作用,检测在此过程中survivin表达的变化,探讨紫杉醇对腺样囊性癌的作用效果及survivin在介导肿瘤耐药过程中的作用。方法:流式细胞仪观察不同浓度紫杉醇对腺样囊性癌ACC-2、ACC-M、ACC-M/DDP细胞的凋亡及细胞周期变化,AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡,RT-PCR检测三种细胞中survivin mRNA的表达及不同浓度紫杉醇作用于ACC-M/DDP后survivin mRNA的表达情况,免疫组化观察裸鼠移植瘤中survivin蛋白表达。结果:流式结果显示小剂量紫杉醇2μg/ml即可对腺样囊性癌三种细胞株产生不同程度的G2/M阻滞,5μg /ml紫杉醇作用24小时ACC-M/DDP的G2/M期为65.4%±1.1与亲本细胞相比显著增强(P<0.05)。Annexin-V/PI双染流式细胞术结果显示紫杉醇对ACC-2、ACC-M和ACC-M/DDP均有不同程度的抑制作用,小剂量紫杉醇(2μg/ml)即可对ACC-M/DDP和ACC-M之间产生差别(P<0.05)。RT-PCR结果显示survivin基因在三种细胞中均有表达,5μg /ml紫杉醇作用24小时与2μg /ml相比ACC-M/DDP survivin mRNA表达有显著性差异,免疫组化结果显示裸鼠移植瘤中ACC-M/DDP组survivin阳性表达明显高于ACC-M组。结论: Survivin在抑制肿瘤细胞凋亡过程中起着重要作用,其表达增强可能是腺样囊性癌产生多药耐药性的原因之一。