背景:婴幼儿血管瘤(Infantilehemangioma,IH)是婴幼儿最常见的先天性良性肿瘤,约60%发生于口腔颌面部。IH多在出生后数天内出现,一般在4周及4-5个月的时候快速生长;1岁以后进入自然消退期,可持续3-8年甚至更长时间,多数为不完全消退。IH的发病机制目前尚不完全清楚,其中血管瘤内皮细胞(Hemangioma Endothelial cells,HemECs)作为IH的最主要细胞成分,直接决定着其各种生物学特性,是现阶段相关研究的主要研究对象。HemECs可分泌血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factors,VEGF),作用于自身或周围同类细胞的相关受体,激活其下游通路,促进血管生成,进而导致IH的增殖。目前国际上主张对IH进行早期积极干预以减少并发症,但现阶段关于IH的多种治疗方法均存在或多或少的缺陷。因此,进一步揭示IH的发病机制,探索更加安全有效的治疗方法仍十分必要。体液免疫系统在机体对抗肿瘤发生发展中发挥重要作用,肿瘤抗原可刺激机体产生抗肿瘤抗体,即免疫球蛋白,可激活补体系统,形成以C5b-9为主要成分的补体膜攻击复合体,通过补体依赖的细胞毒作用,杀伤肿瘤细胞。儿童免疫学的研究表明,婴幼儿抗体补体系统的发育与成熟和IH的增殖消退存在时间相关性。另有研究表明,以IgG为主要成分,麦芽糖为主要辅料的临床常用药静脉注射用人免疫球蛋白(Intravenous Immunoglobulin,IVIg)可通过多种途径抑制血管内皮细胞VEGF表达及作用,对正常内皮细胞如人脐静脉内皮细胞的增殖有抑制作用。现阶段未见关于体液免疫系统与IH关系的基础实验研究,免疫球蛋白是否与IH的发病及病程进展有关需要一步探究。因此,本研究通过组织切片染色检体外细胞培养和药物干预实验等方法,从免疫学角度对IH的发病机制进行初步探究,为免疫球蛋白在IH的临床治疗中的应用提供初步的理论基础。目的:1.检测抗体和补体膜攻击复合体(Membrane Attack Complex,MAC)在不同时期IH中的表达分布情况;2.通过体外药物干预实验,检测IVIg对HemECs的增殖及分泌VEGF情况的影响;3.探讨抗体补体系统与IH发生发展的关系,为免疫球蛋白在IH的临床治疗中的应用提供初步的理论基础。方法:1.选取2010-2016年于山东大学齐鲁医院口腔科或小儿外科手术切除的不同时期IH标本,制备组织切片,以Glut-1免疫组织化学染色明确诊断;HE染色观察不同时期IH中免疫细胞的类型及分布;免疫荧光染色检测不同时期IH中IgG和C5b-9的共沉积情况。2.选取手术切除的新鲜增殖期IH标本,以组织块贴壁法分离培养HemECs;通过CD31+免疫磁珠进行细胞纯化,免疫细胞化学检测纯化前后细胞表达CD31和vWF的情况,流式细胞术进行细胞纯度鉴定。3.配置浓度为0、5、10、15、20、25mg/mL的IVIg和浓度为25mg/mL麦芽糖溶液(作为对照组),进行药物干预,通过CCK-8法检测24h、48h后HemECs的增殖情况;ELISA检测24h、48h后HemECs分泌的VEGF的变化。结果:1.增殖早期IgG和C5b-9表达均不明显;增殖晚期瘤体内血管内皮可见IgG沉积,C5b-9不明显;消退期瘤体内可见IgG和C5b-9强阳性共沉积,局部可见IgG-C5b-9共沉积带。2.组织块贴壁法培养HemECs,组织块种植第3天可见细胞爬出,原代细胞呈多角形或长梭形。CD31+免疫磁珠法成功分离纯化HemECs,CD31和vWF阳性表达,细胞纯度达99%以上。3.CCK-8实验发现IVIg浓度大于等于10mg/mL时,实验组OD值显著降低;ELISA发现IVIg浓度为5mg/mL时,HemECs分泌VEGF的量增多,当药物浓度大于等于10mg/mL时,随药物浓度增加,VEGF的量降低。结论:1.IgG和C5b-9的沉积与IH的消退存在相关性。2.一定浓度的IVIg在体外可显著抑制HemECs的增殖,这可能与IVIg抑制HemECs分泌VEGF有关。3.抗体补体系统在IH的病变发展中存在一定作用,IVIg在IH的治疗中具有一定的临床应用价值。