【摘 要】
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蛋白和多肽类药物具有专一性强、毒性低等优点,使其近年来在医药领域成为研究热点。由于蛋白和多肽类药物存在稳定性差、保存条件要求高等问题,因此,解决蛋白类药物的稳定性
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蛋白和多肽类药物具有专一性强、毒性低等优点,使其近年来在医药领域成为研究热点。由于蛋白和多肽类药物存在稳定性差、保存条件要求高等问题,因此,解决蛋白类药物的稳定性问题对药物的广泛应用十分关键。FGF-2作为人体内重要的细胞因子,存在已上市的蛋白药物,也具有其他适应症应用潜能,然而FGF-2极易产生聚沉反应而失活的特性一直是其应用中的瓶颈。本研究旨在通过抗FGF-2的纳米抗体4(Nanobody4,Nb4)与其结合的方式,在不影响其生物学活性的前提下,增强其稳定性。运用高密度原核细胞发酵和Ni-RTA亲和层析纯化技术获得纯度达95%以上的Nb4和抗FGF-2的纳米抗体6(Nanobody6,Nb6)蛋白。通过摇瓶发酵和CM-Sephadex Fast Flow离子交换层析以及Heparin-sepharose CL-6B亲和层析得到FGF-2蛋白,制成0.2 mg/mL的FGF-2与Nb4混合物(FGF-2+Nb4)和对照组0.2mg/mL FGF-2,对该两类样品在不同温度(4℃、25℃、37℃、40℃)、pH(5、7、9、11)、放置时间(1到4周)、蛋白保护剂与变性剂、转速(500 rpm、1000 rpm)条件下处理。运用Western Blotting和ELISA双抗夹心法检验,再利用细胞划痕、细胞增殖实验进行验证。发现FGF-2在高温、强碱等条件下极不稳定,Nb4随着FGF-2放置时间的延长、温度的升高以及碱性环境变强的条件下对FGF-2的保护作用增强,同时发现,当1 mol/L蔗糖作为辅助蛋白保护剂时的FGF-2+Nb4组效果最好,即1 mol/L蔗糖和Nb4可组合作为蛋白保护剂备选物。
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