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猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的一种传染病，可引起母猪的繁殖障碍以及不同年龄猪的呼吸疾病，给全世界的养猪产业造成了严重的经济损失。由于PRRSV存在抗体依赖性增强作用、高度变异性以及持续性感染等特点，因此，现有的商品化疫苗并不能完全保护猪群免受病毒侵害。研究显示，PRRSV可以诱导机体产生B细胞和T细胞免疫应答，而GP3蛋白作为一个次要结构蛋白在病毒的复制、装配、变异和致病性方面具有重要的作用。因此，本研究利用ELISA和ELISPOT等试验方法筛选GP3蛋白的2个B细胞表位肽段和3个T细胞表位，为研发防治PRRSV的疫苗提供理论基础和数据支持。 使用JXA1-R毒株对试验组的5头猪进行免疫，对照组的3头猪按照同样的方法注射MARC-145细胞的培养上清。首免后每周采血并分离血清，首免12周以后大量采血并分离外周血单核细胞。通过ELISA和Real-Time PCR方法分别检测试验动物血清中N蛋白抗体和病毒载量水平。ELISA结果显示，首免后1周即能在试验动物血清中检测到N蛋白抗体，并且在2～3周达到峰值，随后趋于平稳并持续存在;Real-Time PCR结果显示，首免后1～2周血清中病毒载量达到峰值，之后下降，在加强免疫后2～3周血清中的病毒载量又明显上升，随后从首免后第6周开始下降。 根据GP3蛋白的28～254位氨基酸序列设计并合成24条含有9个氨基酸重叠长度为18个氨基酸的多肽。使用ELISA方法筛选B细胞表位，将合成的24条多肽分别作为包被抗原，检测其与试验动物血清中抗体的免疫反应性，结果显示GP3蛋白B细胞免疫显性表位主要分布于N端第46～99位氨基酸，其中4号肽:P55LCPTRQAAAEILEPGKS72和7号肽:C82SENDHDELGFMVPPGLS99具有更强的免疫反应性;使用ELISPOT方法筛选T细胞表位，经过两轮试验后筛选得到3条阳性多肽，分别为10号肽:A109WLAFLSFSYTAQFHPEI126、13号肽:Y136VDIKHQFICAVHDGDNA153和24号肽:L235GMATRPLRRFAKVLSAA252。随后，将筛选得到的B细胞表位肽段和T细胞表位与21株PRRSV毒株GP3蛋白的相应氨基酸序列用DNASTAR进行比对，分析其同源性。结果显示，本试验筛选到的2个B细胞表位肽段（4号肽和7号肽）与北美洲型毒株相比其同源性分别为84％和90％。3个T细胞表位(10号肽、13号肽和24号肽)与北美洲型毒株相比其同源性分别为99.7％、78％和66％。