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目的:胰腺癌是起源于胰腺外分泌腺的恶性肿瘤,居全球癌症相关死因的第七位。手术是潜在治愈的唯一途径,术后一年内仍有大量患者出现局部复发或远处转移,5年生存率仅为9%。micro RNAs是一类小非编码的RNAs,在转录后水平调控基因表达,参与到恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移等多种生物学过程。目前,mi R-338-5p在消化系统恶性肿瘤中的作用存在争议,其在胰腺癌中的作用尚未阐明。本研究主要探讨mi R-338-5p在胰腺癌中的表达模式及生物学功能,明确mi R-338-5p是否通过调控EGFR影响胰腺癌的恶性生物学行为,拟为胰腺癌的靶向治疗提供新的策略。方法:1、首先通过q RT-PCR检测mi R-338-5p在胰腺癌与配对癌旁组织中表达模式,并统计分析mi R-338-5p与临床病理参数的相关性。通过获取TCGA数据库胰腺癌组织m RNA及mi RNAs测序数据,结合GSEA等生信方法,预测mi R-338-5p作用的信号途径及相关生物学功能。在实验验证上,通过Transwell分析细胞迁移、侵袭能力改变,通过肝转移模型体内验证mi R-338-5p对胰腺癌细胞转移的影响。2、采用免疫组化技术检测胰腺癌组织EGFR表达,统计分析mi R-338-5p与EGFR表达相关性。利用Target Scan数据库预测mi R-338-5p与EGFR的3’UTR可能直接相互作用。构建靶基因EGFR的野生型及突变型报告基因质粒,通过双萤光素酶报告基因证实两者之间存在结合活性。采用EGF联合双向调控mi R-338-5p表达的方式,通过Western Blot检测EGFR信号及EMT标记物表达,通过Transwell检测细胞侵袭、迁移的改变。最后,在调控mi R-338-5p的同时过表达或者沉默EGFR,再次通过Western Blot方法检测EMT标记物的表达变化,通过Transwell检测细胞迁移、侵袭能力的改变。最终证明mi R-338-5p抑制胰腺癌EMT依赖于EGFR/ERK信号。结果:1、通过q RT-PCR检测44例胰腺癌与配对癌旁组织中的表达,发现mi R-338-5p在胰腺癌中表达显著低于配对癌旁组织（P=0.004）。在临床资料相关性分析中,mi R-338-5p的表达水平与淋巴结转移（P=0.014）和肿瘤病理分期（P=0.012）呈负相关。基于HALLMARK基因集的GSEA显示:EMT功能基因集富集在排序列表的底部,即mi R-338-5p与EMT表型之间存在负向调控作用。随后检测6个胰腺癌细胞系mi R-338-5p的表达水平,选择中等表达的两个细胞系（Capan-2和PANC-1）进行双向调控。联合EGF诱导EMT表型,我们发现mi R-338-5p抑制EGF诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。进一步在体内构建胰腺癌肝转移模型,结果显示:mi R-338-5p的过表达抑制了胰腺癌细胞肝转移形成。2、免疫组织化学染色结合生物信息学分析,统计结果表明:mi R-338-5p与EGFR表达呈负相关。双萤光素酶报告基因实验证实mi R-338-5p与EGFR之间直接结合。Western Blot实验结果表明:mi R-338-5p过表达抑制了EGFR、磷酸化EGFR（tyr1045、1068）、磷酸化ERK以及EMT间质标记物MMP-9表达,而促进EMT上皮标记物E-cadherin表达。而mi R-338-5p的沉默上调EGFR、磷酸化EGFR、磷酸化ERK以及EMT标记物MMP-9表达,而下调了E-cadherin表达。在AKT/m TOR信号的Western Blot检测中,mi R-338-5p的过表达对信号相关蛋白表达无明显影响。进一步联合EGFR过表达/沉默,Western Blot结果表明,EGFR可以逆转mi R-338-5p对EMT标记物的调控作用。同时Transwell实验结果表明:EGFR可以逆转mi R-338-5p对胰腺癌细胞侵袭、迁移功能的影响。结论:胰腺癌中,mi R-338-5p在胰腺癌组织显著低表达,与淋巴结转移及肿瘤病理分期负相关。mi R-338-5p通过EGF诱导的EGFR/ERK信号抑制胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。