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目的:自然杀伤细胞(NK cells)具有良好的抗肿瘤应用前景。本实验中我们将建立奥沙利铂耐药结直肠癌细胞模型,阐明NK细胞对奥沙利铂耐药细胞的细胞活力、增殖、迁移及侵袭能力的影响,从而探索与NK共培养的结直肠细胞内miR-146b-5p的表达水平变化,阐明WBSCR22与miR-146b-5p之间的调节关系,最后探索miR-146b-5p在NK细胞抑制奥沙利铂耐药大肠癌细胞恶性进展中的作用。方法:将结直肠癌细胞RKO和DLD1用RPMI-1640培养基培养,加入奥沙利铂溶液建立耐药细胞株。通过CCK-8细胞增殖实验,克隆形成实验检测OR-DLD1和OR-RKO细胞的体外增殖活力和克隆形成能力。通过transwell小室细胞侵袭实验检测OR-DLD1和OR-RKO细胞的体外迁移及侵袭能力的变化。荷瘤试验检测NK细胞对OR-DLD1和OR-RKO细胞的异体成瘤能力的影响。体内外实时荧光定量PCR和Western blot实验检测OR-DLD1和OR-RKO细胞中,WBSCR22的mRNA和蛋白的表达水平,以及miR-146b-5p的mRNA表达水平。通过miRNA在线靶标预测网站miRanda,克隆构建了连接有WBSCR22基因3’UTR序列的双荧光报告基因质粒,并对预测的miR-146b-5p作用位点进行突变得到突变质粒。建立了稳定敲低miR-146b-5p表达的细胞株,并与NK细胞共培养或共注射,探索OR-DLD1-anti-control,OR-DLD1-anti-miR-146b-5p,OR-RKO-anticontrol和OR-RKO-anti-miR-146b-5p细胞株的体内外功能差异。结果:1在DLD1和RKO细胞基础上,建立了耐药细胞株并命名为OR-DLD1和OR-RKO,相对DLD1和RKO细胞,OR-DLD1和OR-RKO细胞在奥沙利铂作用下细胞增殖活力和克隆形成能力都显著性增强。2与NK细胞共培养的奥沙利铂耐药细胞株OR-DLD1和OR-RKO的体外增殖活力、克隆形成、迁移及侵袭能力均显著性下降,与NK细胞共注射的奥沙利铂耐药细胞株OR-DLD1和OR-RKO的体内成瘤能力显著性下降。3通过实时荧光定量PCR实验我们发现,相对未与NK共培养的对照细胞,与NK细胞共培养的OR-DLD1和OR-RKO细胞中,WBSCR22的mRNA表达水平均显著性下调。通过Western blot实验我们发现,相对未与NK共培养的对照细胞,与NK细胞共培养的OR-DLD1和OR-RKO细胞中,WBSCR22的蛋白质的表达水平均显著性下调。相对与未与NK细胞共培养的细胞,与NK细胞共培养的细胞中miR-146b-5p表达显著性上调。我们提取BALB/c裸鼠体内的OR-DLD1和OR-RKO移植瘤细胞中的miRNA,并通过实时荧光定量PCR实验发现,相对与未与NK细胞共注射的移植瘤细胞,与NK细胞共注射的移植瘤细胞中miR-146b-5p表达显著性上调。4双荧光报告基因实验表明miR-146b-5p能显著抑制连有WBSCR22的3’UTR野生型质粒的荧光素酶活性,而对突变型质粒的荧光素酶活性没有明显的影响。NK细胞共培养的细胞中连有WBSCR22的3’UTR野生型质粒的荧光素酶活性显著降低,而突变型质粒的荧光素酶活性没有明显的变化。5抑制miR-146b-5p的表达后,NK细胞对OR-DLD1和OR-RKO细胞在细胞活力、增殖、迁移及侵袭的抑制被显著性削弱。结论:1 OR-DLD1和OR-RKO细胞是对奥沙利铂耐药的耐药细胞株。2 NK细胞能抑制奥沙利铂耐药结直肠癌细胞株的体内外细胞活力、增殖、迁移及侵袭能力。上述实验表明,NK细胞能通过上调miR-146b-5p的表达来抑制WBSCR22的mRNA及蛋白的表达水平。miR-146b-5p能通过靶向WBSCR22的3’UTR抑制WBSCR22的表达。3 MiR-146b-5p是NK细胞抑制奥沙利铂耐药肠癌细胞细胞活力、增殖、迁移及侵袭的关键性效应分子。