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目的 1、建立荷绿色荧光蛋白GFP(green fluorescent protein)基因标记的小鼠Lewis肺癌(LLC)移植瘤小鼠模型，实现活体、无创、实时和动态地观察研究肿瘤的生长、转移、肿瘤血管生成及治疗效果。2、利用以上模型和荧光分子成像技术，观察内皮抑素对小鼠LLC移植瘤的抑瘤作用，及对血管内皮生长因子(VEGF)和Bc1-2蛋白表达的影响。材料与方法1、在体外将pLEIN-CMV-GFP逆转录病毒载体质粒转入PT67包装细胞，测定病毒滴度，利用逆转录病毒载体pLEIN将GFP报告基因转染入小鼠LLC肿瘤细胞。使GFP在体外稳定表达后用G418筛选，收集转染成功并GFP高效表达的LLC肿瘤细胞。2、取0.2ml／2×10~6个／ml的细胞悬液种植于裸鼠背部皮下，使之生长形成移植瘤。在不同时间对裸鼠活体成像，摸索出成像的最佳条件，观察移植瘤的生长、转移及局部血管生成情况。3、选取15只雄性裸鼠，将肿瘤接种于裸鼠背部皮下。当移植瘤体积生长至400.600mm~3时分组并开始给药。实验小鼠随机分为三组，A组为空白对照组，B组每日局部注射内皮抑素20μg，C组每日局部注射环 天津医科大学博士研究生学位论文磷酞胺(cTx)1 omg/kg，作为阳性对照，共11天。采用活体荧光成像测定抑瘤率及并测定微血管密度的方法评价治疗效果，免疫组化(S一P)法测定VEGF和Bcl一2在各组的表达水平。结果1、经体外G418筛选，可以获得GFP基因稳定高效表达的肿瘤转染细胞，将该细胞在小鼠背部接种并形成移植瘤模型;可通过荧光活体成像仪观察:活体内肿瘤早期的生长变化及肿瘤血管的新生和发展情况，病理学证实发光组织与肿瘤组织一致。2、试验组较空白对照组抑瘤率增高(P<0.05)，与CTX组无显著差异;试验组微血管密度较空白对照组降低，VEGF和Bcl一2水平较对照组低(P<0.01)，试验组微血管密度及vEGF和Bcl一2水平较CTX组降低(P<0.05)，肿瘤荧光成像见肿瘤大部发出绿色荧光，发光部位随肿瘤大小的改变而改变，不随肿瘤生长时间减弱。结论1、该模型稳定可靠，GFP基因在小鼠LLC移植瘤细胞内获得了稳定表达，荧光显像清晰稳定;自行研发的荧光活体成像仪成像清晰，应用其可以早期发现肿瘤的生长及微转移的形成，及时监测肿瘤的治疗效果;活体、连续成像观察，无需处死动物;利用荧光分子成像的方法，使得处死动物模型获取组织、判断分析肿瘤生长、有否转移、微血管密度计数等繁琐、复杂的方法，变成简单、直接的影像观察，为研究肿瘤提供了新的思路和方法，具有重要意义。2、内皮抑素对小鼠LLC移植瘤的生长有 明显抑制作用，内皮抑素可以通过降低VEGF和B。1一2在肿瘤组织中的 表达而抑制肿瘤生长。