论文部分内容阅读
本研究以山羊β-乳球蛋白5’和3’端为调控序列，以人乳铁蛋白cDNA为目的基因，Neo基因为标记基因，对山羊胎儿成纤维细胞进行了转染、筛选以及核移植等一系列研究。
本文通过高保真长PCR从山羊基因组中扩增出4.132kb的5’端调控序列和1.805kb的3’端调控序列，将两片段克隆至pGEM-Teasy载体上，进行部分序列测定，构建了乳腺特异表达载体BFK40。
本文建立了三个山羊胎儿成纤维细胞系，成功得到了整合外源基因的转基因细胞株，以上述转基因细胞株为供核细胞，以超排得到的MⅡ期卵母细胞去核后作为供质细胞，核移植后将重构胚移植到同步发情的受体母羊子宫内。经过妊娠阶段后，成功分娩出一只雌性羔羊。通过PCR-RFLP分析，克隆羊的基因型和供核细胞完全一致；通过PCR和细胞抗性分析克隆山羊基因组中整合有外源基因BFK40，证明所得山羊为转基因克隆山羊。