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本研究通过活体采集西北农林科技大学萨能羊原种场纯种萨能奶山羊乳腺组织,利用组织块和高密度培养法分离、培养西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞,纯化后通过免疫组化、油红染色、RT-PCR等实验对所培养细胞的生物学特征及功能进行初步的鉴定,并通过对几种转染方法进行比较,得出在分离培养的细胞中转染pEGFP-N1的最佳方案;以此分离培养的奶山羊乳腺上皮细胞为实验材料,利用RACE的方法对H-FABP基因的3’UTR进行了克隆,对得到的H-FABP基因3’UTR、CDs区进行了一些生物信息学分析,并进一步通过构建pEGFP-HFABP重组表达载体对H-FABP基因的功能初步进行了研究,这些研究为进一步揭示H-FABP基因在奶山羊乳腺脂肪酸代谢中的功能及其调控机制提供了一定的理论依据。本研究的主要结果如下:1.应用组织块和高密度培养法成功培养了西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞,该细胞传至96代。细胞生长曲线呈典型的S型,染色体数目众数为60,细胞角蛋白、上皮膜抗原、波形蛋白、β-酪蛋白表达均呈阳性,油红染色后可见细胞质内的脂滴,且细胞表达酪蛋白mRNA。说明运用本方法培养的细胞为正常的乳腺上皮细胞,并具有一定的泌乳功能。对于本实验分离培养的乳腺上皮细胞而言,电穿孔转染法比脂质体转染法更为优越,电穿孔转染法优化条件为电压750V/cm2,电击时间1ms,电击次数3次。该方法可使40-50%的细胞在转染后存活,形态良好,目测约30%的细胞发出较强的绿色荧光。2.成功克隆了H-FABP基因的3’UTR,全长248bp;H-FABP基因的同源性分析表明,CDs区核苷酸序列与牛、人和小鼠的H-FABP基因CDs区相似性分别为97%,88%和83%,3′UTR相似性分别为94%,72%和77%。H-FABP氨基酸序列的分析结果表明,H-FABP氨基酸序列无信号肽、无跨膜结构,三级结构由10条反平行β链(βA-βJ )和2个α螺旋构成。其中10条反平行β链形成β折叠桶,β折叠桶内有一个空洞中心。3.成功构建了pEGFP-N1-HFABP真核表达载体,电穿孔法转染乳腺上皮细胞后利用实时定量检测几个脂代谢相关基因的变化,发现H-FABP的mRNA表达水平上调为对照组的29.97倍,A-FABP上调为1.22倍,HSL没有变化,LXR上调为1.22倍,TIP47上调为1.32倍。提示H-FABP基因与A-FABP、LXR、TIP47基因的表达量之间存在一定关系。