研究背景:多发性骨髓瘤（MM）是一种低增殖活性和低凋亡活性的克隆性疾病,因其缓解率低,复发率高,用传统化疗不能治愈而困扰着临床。目前采用的常规化疗不能从根本上延长患者的无病生存期（DFS）及总生存期（OS）。微小残留病（MRD）常是化疗耐药和复发的主要原因,因此迫切需要有新的治疗策略。正因为如此人们对免疫治疗寄予厚望。希望在化疗基础上结合适当的免疫治疗能够更彻底地清除MRD,进而达到痊愈。肿瘤的免疫治疗自80年代以后有了飞跃的发展,其中,以抗原特异性细胞毒T淋巴细胞（CTLs）介导的肿瘤免疫治疗成为新的热点。MM细胞本身可表达肿瘤特异性抗原和肿瘤相关性抗原,适于进行免疫冶疗。粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）是一种在抗原提呈细胞（APC）的成熟和功能发挥中起重要作用的细胞因子,它能够维持树突状细胞（DCs）成熟,增强DCs抗原捕获能力及促进共刺激分子的表达。因此,我们设想通过体外扩增健康人浓缩白细胞的DCs,然后以多发性骨髓瘤细胞U₂₆₆可溶性抗原冲击致敏DCs,并通过腺病毒转导GM-CSF基因到DCs细胞中,以诱导U₂₆₆抗原特异性CTLs,为基因工程技术辅助免疫治疗MM打下实验基础。目的:研究负载有U₂₆₆可溶性抗原并携带外源基因GM-CSF的DCs,在体外激活自身T细胞形成CTLs对U₂₆₆细胞的杀伤作用。方法:利用淋巴细胞分离液从健康人的外周血浓缩白细胞中分离出单个核细胞（PBMC）,然后通过贴壁法得到单核细胞。所得的单核细胞应用GM-CSF和IL-4联合诱导培养,到第7天加TNF-α诱导成熟。通过光镜、透射电镜观察DCs形态,流式细胞术检测DCs白细胞免疫标记,ELISA检测DCs的IL-12分泌情况,混合淋巴细胞培养研究DCs免疫激活功能等生物学特性;用含有外源基因GM-CSF的腺病毒反复感染293细胞,以扩增病毒滴度;用U₂₆₆可溶性抗原致敏DCs,再用含有外源基因GM-CSF的腺病毒感染DCs,将所得的DCs与T细胞混合培养5天,以形成对U₂₆₆具有特异杀伤作用的CTLs,最后通过测定LDH以计算CTLs对U₂₆₆的杀伤率,并用ELISA法检测特异性CTLs的IFN-γ分泌情况。