本文主要分为以下几个部分:　　第一章胰腺β细胞CASK基因特异性敲除小鼠制作鉴定及表型分析　　目的：糖尿病是一类以血糖升高为特征的代谢性疾病，由于胰岛素分泌绝对或相对不足导致血糖升高，进而诱发糖尿病。钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase，CASK）在参与细胞内外信号传递、基因转录调控、神经递质释放、离子通道的调节和突触的信号传递等功能中发挥重要作用。前期的细胞学研究结果显示，CASK参与了胰岛素囊泡的锚定环节。为了在小鼠水平研究CASK基因缺失对胰岛素囊泡转运的影响，本实验拟建立胰岛β细胞CASK基因特异性敲除的小鼠动物模型，初步完成鉴定及表型分析。　　方法：1.利用条件性基因打靶和染色体位点特异性重组酶Dre-Rox系统，借助于同源重组将两个同向的loxP位点置于CASK基因的编码重要功能域外显子6两侧的内含子序列中，从而获得表型正常的CASKloxP/-小鼠。2.利用CASKloxP/Y小鼠与MIP-Cre/ERT小鼠杂交后，tamoxifen诱导Cre酶进入细胞核剪切loxP位点之间基因序列，得到胰岛β细胞CASK特异性敲除小鼠。3.免疫荧光验证CASK基因敲除效率。4.利用免疫荧光观察胰岛大小及胰岛内α细胞和β细胞分布。　　结果：1、Southern Blot显示CASKloxP/-小鼠基因标记位置正确；2、免疫荧光显示，CASK在胰腺各种细胞中均有表达，敲除小鼠胰岛β细胞中CASK的蛋白表达下降；3、特异性敲除小鼠胰岛β细胞CASK对胰岛内α细胞和β细胞分布无明显差异。　　结论：成功制备胰岛β细胞特异性CASK基因敲除小鼠，尚未发现明显表型的异常。　　第二章转录因子PPARγ对CASK的转录调控作用　　目的：探讨转录因子PPARγ对CASK的转录调控作用。　　方法：用不同浓度罗格列酮处理胰岛β细胞系INS-1细胞观察胰岛素分泌的变化；用不同浓度及不同时间罗格列酮处理INS-1细胞，利用定量PCR、western blot、免疫荧光检测CASK的表达变化；染色质免疫共沉淀寻找转录因子PPARγ在CASK启动子区域结合位点；利用PPARγ特异性干扰片段预处理INS-1细胞后观察罗格列酮对CASK的影响；观察干扰CASK后对罗格列酮刺激的胰岛素分泌有无影响。　　结果：罗格列酮处理后INS-1细胞的KSIS功能明显增强（P＜0.05）；不同浓度及时间罗格列酮处理INS-1细胞后CASK的mRNA和蛋白水平呈剂量及时间依赖性增加（P＜0.05）；染色质免疫共沉淀显示PPARγ在CASK启动子区有结合位点；罗格列酮对CASK的调控部分通过PPARγ途径（P＜0.05）；干扰CASK对罗格列酮刺激的胰岛素分泌没有影响（P＞0.05）。　　结论：1.PPARγ激动剂罗格列酮上调INS-1细胞中CASK基因的表达；2.CASK不参与罗格列酮对胰岛素分泌的调控作用。