猪骨骼肌肌纤维类型和结构特征是影响猪肉品质的一个关键因素。本研究结合课题组前期高通量测序的结果和数据分析,以可能调控肌纤维类型的miR-127为研究对象,旨在阐述miR-127靶向基因及其调控通路。本试验以60头阉割杜×(长×大)猪(DLY)63d、98d和161d背最长肌为试验样品,通过制作石蜡切片和HE染色测定不同发育阶段其肌纤维类型比例。后又以1日龄DLY仔猪为试验对象,分离出原代猪骨骼肌卫星细胞,转染miR-127mimics/inhibitor,运用实时荧光定量PCR(SYBR Green I)方法测定骨骼肌卫星细胞中ACO2、SETD8、MEF2、MAPK1、MAPK3、MAPK4和MYH7等肌纤维发育相关基因表达量,同步采用Western blot的方法测定骨骼肌卫星细胞中MYH7蛋白的表达量。配制无赖氨酸的细胞培养基,培养骨骼肌卫星细胞24h后收集细胞,测定MEF2和MYH7基因表达量。最后通过构建载体,将正常序列ACO2-TargetN和突变序列ACO2-TargetM分别连接到含有萤光素酶报告基因的质粒,试验组与miR-127的mimics共转染进293A细胞,对照组与阴性对照NC共转染进293A细胞,结合萤光素酶活性检测来验证miR-127与ACO2之间的靶位关系。结果表明:1.随着猪日龄的增加,Ⅱa型红肌纤维所占比重逐步减少,63d龄所占比重显著高于98d和161d龄(P<0.05),98d和161d龄之间所占比重差异不显著(P>0.05);随着猪日龄的增加,Ⅱx+Ⅱb型白肌纤维所占比重逐步增多,63d龄所占比重显著低于98d和161d龄(P<0.05),98d和161d龄之间所占比重差异不显著(P>0.05)。2.骨骼肌卫星细胞转染miR-127的模拟物mimics之后,细胞中慢肌纤维MYH7基因和蛋白表达量显著下降(P<0.05),ACO2、MEF2和MAPK3基因表达量显著下降(P<0.05),对SETD8、MAPK4和MAPK1的基因表达无显著影响(P>0.05);而转染miR-127的抑制剂inhibitor之后,细胞中慢肌纤维MYH7基因表达量无显著变化(P>0.05)、但蛋白表达量显著上升(P<0.05),ACO2和MEF2的基因表达显著上升(P<0.05),对SETD8、MAPK4、MAPK3和MAPK1的基因表达无显著影响(P>0.05)。3.无赖氨酸培养基培养骨骼肌卫星细胞试验中,在缺乏赖氨酸的条件下,骨骼肌卫星细胞中MEF2基因表达显著下降(P<0.05),MYH7基因表达也表现出下降趋势,但差异不明显(P>0.05)。4.miR-127的mimics能使pmirGLO-ACO2-TargetN质粒萤火虫荧光素酶活性降低38.3%(P<0.05),而miR-127的mimics与pmirGLO-ACO2-TargetM共转染时对其萤火虫荧光素酶活性无显著影响(P>0.05)。综上所述,miR-127通过靶向抑制ACO2基因表达,降低细胞内赖氨酸含量,进而抑制MEF2和MYH7基因表达,而MYH7又是慢肌纤维的特征性基因,因此miR-127参与了肌纤维类型的调控。