副结核病是主要由禽分枝杆菌副结核亚种引起的一种慢性消耗性疾病,在许多国家尤其是发展中国家仍广泛流行,该病给畜牧业造成了巨大的经济损失。因此,控制副结核病的意义重大,然而,至今仍没有一种疫苗可用于该病的预防。本研究利用PCR技术,以本实验室构建好的重组质粒pET32a-0862-2154c和pET32a-2751-2762c为模板扩增出map0862-2154c和map2751-2762c,连接到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,构建了真核重组质粒pCDNA-map0862-2154c(简称pC0862-2154c)和pCDNA-map2751-2762c(简称pC2751-2762c),并原核表达纯化了融合蛋白r0862-2154c和r2751-2762c。分别以融合DNA疫苗、重组亚单位疫苗、灭活苗、BCG及pCDNA3.1(+)免疫4月龄牛,共免疫3次,每次间隔2周,灭活苗和BCG仅免疫1次。于免疫后每周颈静脉采血分离血清,分别以融合蛋白r0862-2154c和r2751-2762c为包被抗原,间接ELISA方法检测血清中抗体水平;每次免疫后2周,以融合蛋白r0862-2154c和r2751-2762c混合物为刺激源,MTT法检测淋巴细胞增殖情况(刺激指数SI值);每次免疫后2周,以ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-6分泌水平;并且在三免后第三周,以牛分枝杆菌纯化蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)进行了皮内变态反应试验。结果表明,重组亚单位疫苗组的血清抗体水平明显高于其它各组,其中融合DNA疫苗组的血清抗体水平要高于灭活苗和BCG;融合DNA疫苗组的IFN-γ、SI值及IL-2分泌水平明显高于其它各组,并且分泌水平很高;融合DNA疫苗组的IL-4及IL-6分泌水平也高于其它各组,但分泌水平较低。PPD皮内变态反应试验结果显示,融合DNA疫苗组、重组亚单位疫苗组及对照组的皮肤厚度差并无变化,而灭活苗和BCG免疫组呈现阳性变态反应。本研究的实验结果表明,融合DNA疫苗对细胞免疫和体液免疫均会产生明显影响,细胞因子分泌水平明显高于其它各组,并且与PPD不发生交叉反应,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景,为副结核病新型疫苗的研究奠定了基础。