为了筛选苹果离体叶片再生效率较高的基因型,为苹果转基因研究提供转化受体新材料,本研究以‘惠’自交F1代和‘华富’ב皇家嘎拉’、‘寒富’ב元帅80-3’、‘元帅80-3’ב寒富’杂交F1代实生苗为试材,采用茎段培养获得试管苗,筛选出增殖能力最强的单株‘惠’自交后代Meg-5,进一步对影响其离体叶片再生不定芽的主要因素进行研究,建立了高效离体叶片再生体系,并在此基础上,初步建立了根癌农杆菌介导的Meg-5遗传转化体系。主要研究内容和结果如下:1.不同杂交组合后代试管苗增殖能力不同杂交后代的试管苗增殖能力差异明显,‘华富’ב皇家嘎拉’杂交后代试管苗增殖能力较强,其中最强的单株为09-294,增殖系数为3.06;‘寒富’ב元帅80-3’、‘元帅80-3’ב寒富’2个杂交组合后代试管苗增殖能力均较差,增殖系数在1.03~1.56。2.Meg-5试管苗离体叶片高效再生体系研究了激素浓度、暗培养时间、叶片部位、叶片放置方式、试管苗苗龄等对Meg-5试管苗离体叶片再生的影响。结果表明:适宜的再生培养基配方为MS+2.0 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+2.6 g/L胶立得(Gelzan);最佳暗培养时间为14~21 d;从叶尖部到叶柄部再生效率逐渐升高,叶背向下接种优于叶背向上;最适试管苗苗龄为20~30 d。在此条件下,Meg-5试管苗离体叶片不定芽再生频率可达到100%,单片叶平均再生芽数可达到31.59个。当不定芽长至3 cm以上时,将其转至生根培养基1/2MS+0.3 mg/L IBA+0.2 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂上,生根率可达100%,平均生根条数7.26条,平均根长3.9 cm。幼苗移栽成活率100%,获得完整植株。3.根癌农杆菌介导的Meg-5遗传转化体系在建立Meg-5试管苗离体叶片高效再生体系的基础上,研究了抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、预培养时间、菌液侵染时间、共培养时间、推迟选择时间对其转化效率的影响。结果表明,适宜的Km筛选压为15 mg/L、Cef浓度为200 mg/L,菌液浓度OD600值为0.4~0.6,侵染时间为7 min,预培养时间为2 d,共培养时间为2~3 d,推迟选择时间为2 d。在此条件下,Meg-5试管苗离体叶片抗性芽再生率最高为4.17%。随机选择抗性芽进行PCR检测后证明,利用此转化体系可成功获得Meg-5的转基因植株。