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目的:研究蛇床子素对胎鼠长骨生长,两种雌激素受体亚型(ERa和ERB)、转化生长因子TGF-βl及受体Ⅱ蛋白水平的影响,对MC3T3-El成骨样细胞增殖和分化的影响,为探讨蛇床子素对骨的作用及机制提供实验依据。
方法:①取16天胎龄雌性小鼠尺骨测量长骨骨总长后,随机分为空白对照组、蛇床子素组及雌酚酮同阳性对照组,于含有1×10<'-6>mol/L雌酚酮或l×10<'-7>mol/L、1×10<'-6>mol/L、1×10<'-5>m0J/L、1×10<'-4>mol/L蛇床子素的BGJb培养基中旋转培养48h后,解剖显微镜下测量长骨总长,固定、切片,用免疫组织化学结合计算机图像分析手段考察雌激素受体亚型(ERa和ERB)、转化生长因子TGF-βl及受体TβRⅡ在长骨骺板静止区、增殖区和肥大区中的定位和表达情况,计数骺板各区免疫反应阳性细胞数,图像分析系统下测定阳性细胞面积。②将不同浓度的蛇床子素加入到MC3T3-El成骨样细胞株的培养基中,在倒置相差显微镜下观察细胞形态和数量的改变,考察蛇床子素对MC3T3-El成骨样细胞生长曲线的影响;用MTT法考察蛇床子素对MC3T3-El成骨样细胞增殖的影响:用磷酸苯二钠(PNPP)法测定蛇床子素对细胞外碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。
结果:①经个川浓度的蛇床子索和雌酚酮处理后,胎鼠K骨骨总长显著增加。与空白对照组相比,蛇床子素1×
10<'-7>mol/L、1×10<'-6>mol/L、1×10<'-5>mol/L和雌酚酮1×10<'-6>mol/L组有显著性差异(P<0.01)。蛇床子素1×10<'-4>mol/L组骨总长有增加的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。②蛇床子素和雌酚酮均能显著上调软骨骺板静止区、增殖区、肥大区ERa、ERB、TGF-βl和TβRⅡ蛋白水平。当蛇床子素浓度由1×10<'-7>mol/L、1×10<'-6>mol/L、1×10<'-5>mol/L逐渐升高时,各区ERa、ERβ、TGF-βl和TBRⅡ蛋白表达升高,而1×10<'-7>mol/L组各区ERa、ERB、TGF-βl和TβRⅡ蛋白表达降低。与雌酚酮组相比,各浓度组长骨骺板ERa和ERβ表达均有显著性差异(P<0.01或Pmol/L组外,其他各组长骨骺板各区TGF-βl和TβRⅡ表达与雌酚酮组相比有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。③蛇床子素能促进MC3T3.E1成骨样细胞的增殖,其作用在第48d'时最为明显。④蛇床子素干预后第4天,与空白对照组相比,1×10<'-7>mol/L~1×10<'-5>mol/L的蛇床子素浓度依赖性地增加MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶的活性(P<0.01或P
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