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目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在兔睾丸中度缺血/再灌注损伤中（IRI）的变化，研制一种具有靶向结合能力的新型脂质微泡，评价靶向微泡在兔睾丸中度缺血/再灌注损伤中的价值。方法第一部分：12只成年健康大白兔随机分成：对照组（假手术组/S组），中度缺血再灌注组（IRI组），每组6只。S组随机暴露一侧精索，6h后取暴露侧睾丸，福尔马林固定24h后行HE及免疫组化染色。IRI组随机选择一侧睾丸进行扭转手术，将术侧睾丸完全阻断4h后解除结扎，再灌注2h后取术侧睾丸，福尔马林固定24h后行HE及免疫组化染色。在光学显微镜下观察MMP-9在睾丸中的分布，采用image-proplus6.0Ver图像处理系统半定量分析MMP-9的平均光密度。第二部分：制备普通脂质微泡和靶向脂质微泡将各种相关脂质材料按一定比例溶解于适量蒸馏水中，交替使用60℃水浴和超声波振荡至分散完全，通六氟化硫（SF6）气体，机械振荡至形成乳白色液体即制备好普通脂质微泡或生物素化脂质微泡。生物素化脂质微泡冰上静置弃下清液纯化后，按一定比例加入亲和素，继续冰上静置，弃下清液纯化后，按一定比例加入生物素化的抗MMP-9抗体，冰箱4℃保存备用。采用血细胞计数仪测量普通微泡和靶向微泡的粒径及浓度。采用FITC标记的二抗与携MMP-9抗体微泡结合，荧光显微镜下观察抗MMP-9抗体与微泡的连接情况。第三部分：18只健康大白兔随机分成3组：对照组（假手术组/S组）、中度缺血再灌注未爆破组（IRI-1组）、中度缺血再灌组爆破组（IRI-2组），每组6只。S组随机暴露一侧精索，6h后行普通脂质微泡（MB）和携抗基质金属蛋白酶-9抗体脂质微泡（TMB9）的双侧睾丸造影。IRI-1组随机选择一侧睾丸进行扭转手术，将术侧睾丸完全阻断4h，再灌注2h后行MB和TMB9的双侧睾丸造影，实验结束后处死实验兔，取术侧睾丸，福尔马林固定24h后行HE染色和免疫组化染色。IRI-2组随机选择一侧睾丸进行扭转手术，将术侧睾丸完全阻断4h，再灌注2h后，首先经耳缘静脉团注MB，结合高频高能量超声触发显像增强微血管通透性，20min后睾丸行TMB9造影。记录缺血再灌注睾丸及正常睾丸显影图像，全部声学造影图像存于机内，以备脱机分析。采用专业超声软件分析造影图像，评价实验兔睾丸显影的曲率（Slope）、达峰时间（Tp）、峰值强度（PI）、降半时间（DT/2）、平均渡越时间（MTT）及曲线下面积（AUC）。同时在光学显微镜下观察IRI-1组的MMP-9在睾丸中的分布，采用image-proplus6.0Ver图像处理系统半定量分析MMP-9的平均光密度。使用SPSS19.0软件进行统计学分析，所有数据均以χ±s表示，组间数据的两两比较采用单因素方差分析，差异性检验水准设为p <0.05。结果第一部分对照组睾丸光学显微镜下HE染色显示睾丸大部分血管及生精小管基膜完整，各级生精细胞排列整齐有序，精子数目众多，间质无明显充血、水肿，未见明显中性粒细胞。免疫组化结果示血管内、血管基膜及睾丸间质均未见明显基质金属蛋白酶-9表达。IRI组睾丸光学显微镜下HE染色显示睾丸组织大部分生精小管基膜及血管的不完整，部分生精上皮层次减少，成熟分化障碍，部分管腔被大量坏死脱落的细胞充填，间质可见明显充血及白细胞浸润，免疫组化示血管基底膜及间质可见明显的MMP-9表达。术侧MMP-9平均光密度值为0.124±0.034。第二部分MB及TMB9肉眼观外观呈白色悬浊液，光学显微镜下均呈圆形，完整，分布均匀，粒径约1.5m~4m，微泡浓度均约4.8×108个/ml，荧光显微镜下MB未见明显荧光，TMB9可见明显绿色荧光围绕。第三部分对照组MB与TMB9超声造影均表现为睾丸包膜下先增强，接着睾丸实质开始均匀的增强，达到峰值强度后，再缓慢消退，双侧睾丸超声造影时间-强度曲线基本一致，MB组的造影参数（Slope、TP、PI、DT/2、MTT及AUC）较TMB9组无明显统计学意义（P>0.05）；IRI-1组的MB组和TMB9组的睾丸超声造影均表现为术侧睾丸实质较正常侧增强速度更快，迅速达到峰值强度，且强度显著增高，再缓慢消退，术侧时间-强度曲线较健侧峰值明显升高、前移且下降延迟，呈现“快进慢退”现象，术侧睾丸造影时间-强度曲线显示TMB9组较MB组的达峰时间前移，峰值升高、下降延迟且平均造影时间长，均有统计学意义(P<0.05)。IRI-2组术侧睾丸TMB9造影表现与IRI-1组类似，两组造影参数差别无明显统计学意义（P>0.05）。IRI-1组术侧睾丸的MMP-9平均光密度值为0.080±0.014，较TMB9造影前睾丸的MMP-9平均光密度值差别有计学意义（P<0.05）.结论1、兔睾丸中度IRI时睾丸血管基底膜及间质可见明显的MMP-9表达，而正常兔睾丸血管基底膜及间质未见明显MMP-9的表达；2、成功制备了普通脂质微泡、生物素化脂质微泡和携抗MMP-9单抗靶向超声微泡；3、与MB组相比，TMB9组在中度IRI的睾丸中滞留时间长、浓度高；4、当微泡被高能量超声破坏时，其瞬时所产生的“声空化”效应并不能够增强TMB9的靶向显像能力。