瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞Survivin表达的影响

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目的:研究瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞生长抑制作用和凋亡诱导作用,以及对Survivin蛋白表达的影响,探讨瑞香狼毒水提取物抗人膀胱癌的作用机制。方法:实验细胞分为对照组及实验组,对照组定期更换细胞培养液,不加药物干预,实验组按所加药物浓度(0.04g/ml、0.2g/ml、1g/ml、5g/ml)分为4组。用不同浓度的瑞香狼毒水提取物0g/ml、0.04g/ml、0.2g/ml、1g/ml、5g/ml作用于人膀胱癌T24细胞12h、24h、48h、72h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各孔吸光度OD值,检测瑞香狼毒水提取物对膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用;用不同浓度的瑞香狼毒水提取物0g/ml、0.04g/ml、0.2g/ml、1g/ml、5g/ml作用于人膀胱癌T24细胞48h后,分别利用流式细胞术及免疫细胞化学检测细胞凋亡率及细胞中survivin蛋白的表达。结果:瑞香狼毒水提取物0.04g/ml、0.2g/ml、1g/ml、5g/ml对膀胱癌T24细胞分别处理12h,24h,48h,72h后,与对照组相比,生长均受到不同程度地抑制,应用MTT法分别测定对照组及各实验组OD值,计算增殖抑制率,发现膀胱癌T24细胞的增殖抑制率与药物浓度及作用时间有着依赖关系,即随着瑞香狼毒水提取物作用时间的延长和作用浓度的增大,瑞香狼毒水提取物对膀胱癌T24细胞的抑制率越明显,与对照组相比各浓度组所测增殖抑制率的差异有统计学意义(P<0.05),各浓度组之间增殖抑制率差异亦有统计学意义(P<0.05);膀胱癌T24细胞经不同浓度瑞香狼毒水提取物0.04g/ml、0.2g/ml、1g/ml、5g/ml作用48h后,应用流式细胞技术检测细胞凋亡率分别为(11.672.61)%,(22.403.18)%,(38.292.30)%,(57.573.77)%,对照组(1.050.34)%,随着药物浓度的增加,膀胱癌T24细胞凋亡增多,各实验组与对照组凋亡率相比差异有统计学意义(P<0.05),高浓度组与低浓度组相比差异亦有统计学意义(P<0.05);瑞香狼毒水提取物0.04g/ml、0.2g/ml、1g/ml、5g/ml分别作用于膀胱癌T24细胞48h后,应用免疫细胞化学检测Survivin蛋白表达,测灰度值分别为:142.491.67,152.142.66,161.634.44,171.721.17,对照组灰度值130.844.99,随着药物浓度的增加,灰度值越高,膀胱癌T24细胞中Survivin蛋白表达愈低,各实验组与对照组灰度值相比差异有统计学意义(P<0.05),高浓度组与低浓度组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论:①瑞香狼毒水提取物明显抑制人膀胱癌T24细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性;②瑞香狼毒水提取物可以诱导膀胱癌T24细胞凋亡,且随着药物浓度的增加促凋亡作用愈明显;③瑞香狼毒水提取物可以下调膀胱癌T24细胞中Survivin蛋白表达,且随着药物浓度的增加下调作用愈明显。
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