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目的:探索从健康成人的脂肪组织中提取、培养并鉴定脂肪干细胞,探索脂肪干细胞在促进任意型皮瓣成活过程中的作用。 方法:用健康成人的脂肪组织,剔除血管和纤维结缔组织后剪碎并用胶原Ⅰ酶消化,获得脂肪干细胞在体外培养及进行流式细胞术鉴定。使用第5代已经DIO荧光标记的活的脂肪干细胞,2×106悬浮于0.5mlDMEM培养基中。于大白兔背部对称地设计两个蒂在头侧的任意型皮瓣(长6cm宽2cm),左侧为对照组,右侧为实验组,将悬浮有ADSCs的DMEM0.5ml分5点注入大白兔实验组任意型皮瓣模型中(n=10),作为比较,对照侧同样分5点注入DMEM0.5ml,观察实验组、对照组皮瓣成活情况,于术后7日分别计算皮瓣成活面积;随机作冰冻切片,在激光扫描共聚焦显微镜下观察切片荧光显影情况;随机作常规切片 HE染色,光镜下观察皮瓣组织毛细血管分布密度。统计学分析脂肪干细胞在促进任意型皮瓣成活过程中的作用。 结果:1、可以从健康成人脂肪组织中分离出间充质干细胞,在体外环境稳定扩增传代,使用第5代细胞,经流式细胞仪检测细胞表面高度表达CD29,CD44,CD105等,表明具有间充质干细胞特性。2、使用第5代已经荧光标记的活的脂肪干细胞注入大白兔皮瓣模型中,观察实验组、对照组皮瓣成活情况,统计学分析实验组皮瓣成活面积(7.17±0.30cm2)显著高于对照组(5.57±0.45cm2)(p<0.01)。组织学检查证实实验组皮瓣毛细血管密度显著增多,具有统计学意义。激光扫描共聚焦显微镜下观察显示:实验组皮瓣的组织冰冻切片中,有带有荧光的血管内皮细胞参与组成了血管壁。 结论:1、本实验成功地从健康成人的脂肪组织中分离了脂肪干细胞;2、这些结果表明,脂肪干细胞具有较好的免疫相容性,并具有加强任意型皮瓣血供的潜力。这种机制可能是脂肪干细胞直接分化成了血管内皮细胞和脂肪干细胞分泌了血管内皮生长因子的间接影响作用。