有机氯农药化学性质极为稳定,在环境中降解缓慢,可通过食物链蓄积于人体脂肪组织,对人体健康造成危害。因此,快速准确的分析测定其在农产品中的残留水平就显得十分重要。本文以有机氯农药中使用较为广泛的百菌清（chlorothalonil,CTN）和腐霉利（procymidone,PRM）为研究对象,对CTN和PRM进行化学修饰后,采用N,N-羰基二咪唑法（N,N-carbonyldiimidazole,CDI）将它们分别与载体蛋白连接,获得了CTN和PRM的完全抗原,然后采用两种抗原同时混合免疫以及常规单独免疫的方法获得抗血清,通过杂交瘤细胞技术,制备得到了抗CTN和PRM克隆子,并对单克隆抗体的特性进行了分析,具体内容如下。1百菌清和腐霉利人工抗原的制备CTN和PRM的分子量分别为265.9和284.1,属于只有反应原性而无免疫原性的半抗原（hapten）,必须与蛋白质等载体结合构建成完全抗原才能刺激动物产生抗体。根据CTN和PRM都具备苯环上连有氯原子的特点,先以乙二醇取代苯环上的氯原子,制得2-羟基取代百菌清（chlorothalonil hydroxy-substituted,CTNH）和3-羟基取代腐霉利（procymidone hydroxy-substituted,PRMH）,然后采用CDI法使它们分别与牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）和卵清蛋白（ovalbumin,OVA）偶联,制备得到免疫抗原CTNH-BSA与PRMH-BSA,包被抗原CTNH-OVA与PRMH-OVA,以紫外和红外光谱对偶联产物进行了分析,结果表明CTNH和PRMH与BSA和OVA偶联成功,偶联摩尔比为CTNH:BSA=11:1,CTNH:OVA=8:1,PRMH:BSA=9:1,PRMH:OVA=8:1。2抗百菌清和腐霉利抗血清制备及其性质研究将CTNH-BSA、PRMH-BSA分别（100μg/只）和等量混合后（总量分别为100μg/只、200μg/只）,以多点、多次注射的方法免疫BALB/c小鼠。对抗体的产生进程分析发现,从第25d开始有明显抗体产生,第55d抗体的ELISA效价最高达1:12800。以上述制备的抗原和抗体为材料,通过方阵滴定实验得到竞争ELISA的抗原抗体浓度如下:抗原混合免疫组6号小鼠抗血清以pH7.4的磷酸盐缓冲液生理盐水（PBS）稀释至1:12800,CTNH-OVA和PRMH-OVA的包被浓度均为8μg/mL:抗原单独免疫组7号小鼠抗血清稀释倍数为1:12800,CTNH-OVA的包被浓度为4μg/mL;11号小鼠抗血清稀释倍数为1:6400,PRMH-OVA的包被浓度为2μg/mL。根据上述条件,按常规ELISA的条件进行竞争ELISA分析,以竞争抗原的浓度对数为横坐标,竞争抑制率为纵坐标,得到抗原混合组6号小鼠针对CTN和PRM的抑制曲线,分别为y=-26.08x+98.933,（R²=0.973）;v=-24.0x+100.4,（R²=0.982）,CTN和PRM的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为79 ng/mL和125ng/mL,对两种抗原的线性检测范围均为10ng/mL～1000ng/mL。抗原单独免疫组7号小鼠的竞争抑制曲线方程为y=-23.58x+91.933,（R²=0.979）,CTN的半数抑制浓度(IC₅₀)为59ng/mL,线性检测范围为10ng/mL～1000ng/mL;11号小鼠的竞争抑制曲线方程为y=-31.08x+119.27,（R²=0.976）,PRM的半数抑制浓度(IC₅₀)为93ng/mL,线性检测范围为10ng/mL～1000ng/mL。3抗百菌清和腐霉利单克隆抗体的制备及其ELISA的建立抗原混合免疫的小鼠在第四次免疫采血后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,融合率为50.3%。采用有限稀释法,从阳性杂交瘤细胞株中筛选得到针对CTN和PRM能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株各1株,分别命名为1H4和5C2。以上述制备的抗原和抗体为材料,通过方阵滴定实验得到了CTN和PRM的间接竞争ELISA的包被抗原（CTNH-OVA和PRMH-OVA）的浓度分别为2μg/mL和4μg/mL,1H4和5C2培养上清液的稀释倍数分别为1:64和1:32,针对CTN和PRM的竞争抑制曲线分别为:v=-25.08x+93.267,（R²=0.9782）和v=-23.64x+93.813,（R²=0.9603）,半数抑制浓度(IC₅₀)分别为54ng/mL和71ng/mL,线性范围均为10ng/mL～1000ng/mL。