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前言FA/BRCA通路是正常细胞参与DNA修复、细胞周期与凋亡调控、解毒功能调节、生命信号转导等必需的,如果该通路受损会导致细胞染色体不稳定以及对DNA损伤剂高度敏感。FA复合体的稳定和FANCD2的泛素化激活是FA/BRCA通路的关键步骤,而FANCF在此过程中发挥着重要作用,FANCF蛋白低表达或功能缺失会干扰FA/BRCA通路的正常功能,进而参与肿瘤发生发展。目前,已在多种实体肿瘤中证实：FANCF蛋白低表达或功能缺失,与肿瘤的发生、发展相关。而关于FANCF是否参与乳腺癌发生发展的调控尚未见报道。为此本实验以FANCF基因为靶点,研究干预FANCF基因对乳腺癌ER(+)MCF-7细胞及ER(-)435S细胞生物学特性的影响,并检测相关指标的变化,探讨FANCF基因是否参与乳腺癌的发生、发展的调控并探讨此调控作用在乳腺癌ER(+)MCF-7细胞及ER(-)435S细胞中是否存在差异,为乳腺癌发生、发展研究提供新的思路。实验方法应用中量试剂盒提取质粒,脂质体法转染人乳腺癌MCF-7,435S细胞中,RT-PCR及Western blot检测FANCF基因mRNA及蛋白表达水平,确认MCF-7-FANCF-RNAi、435S-FANCF-RNAi细胞模型构建成功；FANCF基因沉默前后,分别采用MTT法、流式细胞仪PI单染法及FITC/PI双染法检测细胞增殖、周期及凋亡的改变,采用划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭力的改变以及彗星实验检测DNA损伤情况等生物学特性的变化。实验结果一、成功建立MCF-7-FANCF-RNAi、435S-FANCF-RNAi细胞模型：与Control-shRNA组相比,转染FANCF-shRNA质粒后,MCF-7和435S细胞中FANCF基因mRNA及蛋白表达水平均明显减低,转染后24h、48h及72h,MCF-7及435S细胞FANCF mRNA表达抑制率分别为45.63%±19.91%、50.83.%±15.96%、67.60%±18.80%和33.63%±9.17%、51.60%±17.68%、61.45%±11.65%(P＜0.05)；western blot结果显示,转染后48h及72h,MCF-7及435S细胞FANCF蛋白表达抑制率分别为45.20%±8.87%、55.85%±19.77%和44.93%±15.64%、60.08%±19.17%(P<0.05),说明干预FANCF基因48h、72h时能显著抑制mRNA及蛋白表达,MCF-7-FANCF-RNAi、435S-FANCF-RNAi细胞模型成功建立。二、FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞生物学特性的影响：(一)FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞增殖的影响：与Control-shRNA组相比,FANCF基因沉默后,细胞增殖明显受到抑制,转染后48h、72h,MCF-7及435S细胞增殖抑制率分别为32.38%±4.78%、43.44%±4.42%和31.18%±2.98%、39.49%±1.44%(P＜0.05),且FANCF基因对乳腺癌细胞增殖的调控在MCF-7细胞及435S细胞中没有显著差异(P＞0.05)。(二) FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响：与Control-shRNA组相比,FANCF基因沉默后,细胞周期阻滞于S期,转染后48h、72 h,MCF-7及435S细胞S期比率分别为30.06±6.83%、33.23%±9.09%和31.65%±5.49%、32.34±8.13%(P＜0.05)；促进细胞凋亡,转染后48h、72h,MCF-7及435S细胞凋亡率分别为23.23%±3.60%、35.72%±12.24%和20.07%±7.70%、27.95%±3.95%(P＜0.05)；且FANCF基因对人乳腺癌细胞周期及凋亡的调控在MCF-7细胞及435S细胞中没有显著差异(P＞0.05)。(三) FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞迁移能力及侵袭力的影响：FANCF基因沉默后,MCF-7及435S细胞中划痕宽度变化明显低于Empty与Control-shRNA组(P＜0.05)；且穿过Transwell基底膜的细胞数明显少于与Empty与Control-shRNA组(P＜0.05),说明FANCF基因沉默可以降低人乳腺癌MCF-7及435S细胞的迁移能力及侵袭力。(四) FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞DNA损伤断裂情况的影响：彗星图像显示：与Empty与Control-shRNA组相比,FANCF-shRNA组MCF-7及435S细胞中DNA尾距显著增加(P＜0.05),说明DNA损伤断裂增加。结论FANCF基因沉默可抑制人乳腺癌细胞增殖及侵袭力,促进细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于S期；FANCF基因对人乳腺癌细胞的调控在ER(+)MCF-7细胞及ER(-)435S细胞中没有显著性差异。