【摘 要】
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本文考察了水煎煮法、乙醇浸提法对虎杖有效成分提取效果的影响,结果表明乙醇室温浸提法明显优于水煎煮法。确定乙醇室温浸提法的工艺条件为:虎杖粉碎物,8倍体积的80﹪乙醇60℃水
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本文考察了水煎煮法、乙醇浸提法对虎杖有效成分提取效果的影响,结果表明乙醇室温浸提法明显优于水煎煮法。确定乙醇室温浸提法的工艺条件为:虎杖粉碎物,8倍体积的80﹪乙醇60℃水浴中提取2h,提取次数为3次,提取率为96.3﹪。
从自然界中筛选出能够诱导产生白藜芦醇苷-β-D-葡萄糖苷酶产生菌,用硫铵沉淀法、DEAE-celluloseDE-52阴离子交换法纯化了白藜芦醇苷-β-D-葡萄糖苷酶。SDS-PAGE测定为电泳单点纯,相对分子质量是76kDa。
以白藜芦醇苷为底物进行酶性质的研究,结果显示,白藜芦醇苷-β-D-葡萄糖苷酶反应最适温度60℃,最适pH5.0;在温度低于60℃,pH4.0~5.0之间稳定;Mg2+对酶活力几乎没有影响。Ca2+、Zn2+、Cu2+均对酶反应有抑制作用,其中Cu2+对酶活力影响最为显著。该酶的反应动力学方程为V=0.0194[s]/(0.741+[s])。
酶转化白藜芦醇苷制备白藜芦醇的反应条件为:温度40℃,pH5.0,底物浓度40mg/ml,摇床90r/min酶解反应时间4h,转化率为100﹪。采用硅胶柱层析分离纯化酶解产物,洗脱剂体积比(氯仿:甲醇=9.8∶0.2)分离出白藜芦醇,减压浓缩,低温干燥,得到白藜芦醇白色晶体,纯度为98﹪。以上方法最终得到白藜芦醇晶体为虎杖饮片的1.06﹪,且转化后的酶活力无降低。证明酶转化法制备白藜芦醇简单高效,经济可靠,可实现工业化生产。
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