论文部分内容阅读
目的:探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)作用人前列腺癌PC-3细胞株后,泛素样含PHD和环指域1(Ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)的表达改变及可能诱导的甲基化调控机制。方法:不同浓度(0、25、50和100μmol/L)DHA处理PC-3细胞株48 h,DMSO处理的未加药组为空白对照组。MTT法检测细胞增殖活性。FCM法检测细胞凋亡率、周期分布及活性氧水平(Reactive oxygen species,ROS)。亚硫酸氢盐基因组测序法(BGS)检测p16INK4A基因启动子区域的甲基化水平。实时荧光定量PCR检测UHRF1、甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)及p16INK4A mRNA表达。蛋白质印迹法检测UHRF1、DNMT1及p16INK4A蛋白的表达水平。细胞免疫荧光法检测p16INK4A蛋白的定位及表达。结果:1.MTT和FCM结果表明DHA能通过诱导PC-3细胞凋亡和G1/S期阻滞而抑制细胞增殖,并伴有ROS水平的升高。2.BGS结果显示DHA作用PC-3细胞后,p16INK4A基因启动子区域的甲基化水平明显降低。3.RT-PCR和Western blotting结果显示DHA诱导UHRF1和DNMT1 mRNA及蛋白表达水平明显降低,而p16INK4A表达水平升高。4.细胞免疫荧光结果显示p16INK4A蛋白在细胞核及细胞质中均有表达。DHA作用PC-3细胞后,p16INK4A蛋白定位未发生改变,但p16INK4A蛋白的荧光强度显著增加。结论:DHA可能通过抑制UHRF1和DNMT1的表达,下调p16INK4A基因启动子区域的甲基化水平,从而解除p16INK4A蛋白的表达抑制。最终DHA抑制PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡及G1/S期阻滞,并伴有ROS的生成。DHA作用PC-3细胞的机制可能与UHRF1对p16INK4A的调控有关。