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杨树是我国种植最为广泛的树种之一,全国杨树种植面积约800万公顷,每年12月份至次年2月份是杨树发芽的季节,新生的杨树芽含有丰富的胶质,有学者研究发现杨树芽提取物含有丰富的黄酮类、酚类和萜烯类化合物,这些物质普遍有着良好的抗氧化作用,能够有效清除体内自由基。现代研究发现,氧自由基参与了人类绝大多数疾病的发生,如心脑血管疾病、肿瘤、炎症反应等。目的:对杨树芽提取工艺进行设计并优化,使其达到最优提取率,并填补国内未有学者研究的空白;建立杨树芽提取物HPLC指纹图谱,建立其质量控制标准;对优化后的杨树芽提取物进行体内、体外抗氧化活性的测定,研究其对自由基的清除作用;初步探讨研究杨树芽提取物对SGC-7901人胃癌细胞凋亡机制,为杨树芽的医药产业化研究奠定基础。方法:1、以紫外-可见光分光光度法为检测方法,通过单因素试验确定正交试验条件,后通过正交试验考察乙醇体积分数(%)、提取时间(min)和料液比对杨树芽总黄酮提取工艺的影响,确定其最优提取工艺。2、采用HPLC法,色谱柱为色谱柱MerckC18(4.6×250nm);流动相为甲醇-0.4%磷酸水,梯度洗脱,体积流量为1 mL/min;检测波长为320 nm;柱温为30℃;进样量为10μL。并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范(版本2004A)计算,得出杨树芽提取物指纹图谱,并对其中的咖啡酸等化合物进行检识。3、通过DPPH法、邻苯三酚自氧化法和CuS04-Phen-Vc-H202化学发光体系测定其体外抗氧化活性,并用CuSO4-Phen-Vc-H202-DNA化学发光体系测定杨树芽提取物对· OH致DNA损伤的保护作用。4、将实验小鼠随机分成杨树芽提取物高、中、低剂量组(40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg)、Vc阳性组(10mg/kg)和空白组,连续灌胃给药14天,末次给药后次日眼眶取血,4℃、3500 rpm离心10分钟,取上清,测定MDA、SOD、T-AOC和GSH-Px含量。解剖小鼠,取肝脏、脾脏、胸腺,分别称重,计算胸腺指数和脾指数,肝脏制备组织匀浆液,肝组织匀浆液测定MDA、SOD、T-AOC和GSH-Px含量。综合结果测定杨树芽提取物体内抗氧化活性水平。5、采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检杨树芽提取物对SGC-7901人胃癌低分化细胞的抑制作用;流式细胞仪检测杨树芽提取物干预24/48h后SGC-7901细胞的凋亡情况;western blot法检测SGC-7901细胞内Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达情况。结果:1、正交设计法确定杨树芽提取物最佳提取工艺为10倍的55%乙醇溶液超声40min;确定杨树芽提取物最终提取工艺。2、采用工艺优化后的提取方法制得12批的指纹图谱,此方法可以使杨树芽中有效成分得到较好的分离,最终结果表明,杨树芽提取物中含有13个共有峰,其中确定6种为咖啡酸、P-香豆酸、阿魏酸、芹菜素、乔松素和白杨素,为进一步研究其具体成分奠定了前期基础。3、浓度在0.05~0.8mg/mmL时,对DPPH自由基的清除率为38.1%~94%;浓度为0.1mg/mL时,随物质的量的增大,对邻苯三酚产生的·O2-抑制率为37.4%~44.2%;浓度在0.05mg/mL~0.8mg/mL时,对· OH自由基的清除率为40.8%~60%。DNA损伤体系中,各浓度均表现出良好的损伤保护作用,浓度大于0.4mg/mL时,效果更加明显。4、中、高浓度的杨树芽提取物均能显著提高小鼠免疫水平,增加小鼠脾指数及胸腺指数,提高体内SOD、GSH-PX、T-AOC水平并且降低MDA含量,表现出良好的免疫增强及体内抗氧化活性。5、MTT实验结果表明,杨树芽提取物对SGC-7901细胞增殖有显著的抑制效果,且呈明显的剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测凋亡结果表明,杨树芽提取物有显著地促进SGC-7901细胞凋亡,且凋亡和剂量、时间成正相关关系;western blot结果表明,杨树芽提取物作用48h作用后,SGC-7901细胞Bax基因高表达,Bcl-2基因表达随浓度升高而升高,Caspase-3基因无表达。