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目的观察心脏神经节分布特征,心脏神经节神经元乙酰胆碱(Ach)和孤啡肽(OFQ)的表达特性及共表达特性,以及结扎冠状动脉左前降支对正常大鼠心脏Ach、OFQ表达的影响和对糖尿病大鼠心脏表达OFQ、NE的影响。方法1、将体重250~300g健康成年SD雄性大鼠随机分为手术对照组(sham组)和结扎冠状动脉缺血组(CAO组),每组14只。CAO组动物于全麻状态下结扎左冠脉前降支,sham组动物只行绕冠脉穿线而不结扎血管。于扎闭冠脉或者冠脉下穿线30min取心脏标本。做全心冠状连续切片,采用HE染色法和尼氏(Nissl)染色法观察心脏神经节的分布特征;采用免疫荧光标记技术观察Ach和OFQ的表达和共表达特性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常大鼠急性心肌缺血后心房和心室肌组织表达Ach和OFQ的变化。2、体重180~200g健康成年SD雄性大鼠随机分为5组,糖尿病组、辣椒素干预的糖尿病组、STZ溶剂组、(辣椒素+STZ)溶剂组、空白对照组,每组16只,成模后饲养2.5个月,再将每组等分为sham组和CAO组。采用免疫荧光标记技术观察OFQ和NE的表达变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测糖尿病大鼠心房和心室肌组织表达OFQ和NE的变化。结果1、HE染色和Nissl染色显示,心脏神经节主要分布于心房脂肪垫内、心脏大血管周围脂肪组织内、心房肌间及房室交界处,偶见于心室肌间。心脏神经节细胞呈强嗜碱性,为多角形、椭圆形,核居中,周围有卫星细胞环绕,神经节有结缔组织被膜。2、免疫荧光双标显示:(1)40倍视野下随机取sham组15个神经节内190个细胞和CAO组15个神经节内240个细胞计数,结扎冠脉后单纯表达Ach的细胞减少19.2%,单纯表达OFQ的细胞增加4.3%,共表达细胞数量增加13.5%。(2)Ach和OFQ免疫阳性表达细胞还见于大血管壁、脂肪组织中及心肌间。心房、心室肌也有Ach和OFQ免疫阳性表达。(3)结扎冠脉组动物神经节细胞Ach免疫荧光强度降低28%(P<0.01);心房肌和心室肌Ach荧光光密度CAO组显著低于sham组(心房肌平均光密度降低44%,P<0.01;心室肌平均光密度值降低36%,P<0.01)。(4)结扎冠脉组动物神经节细胞OFQ免疫荧光强度增加22%(P<0.01);心房肌和心室肌OFQ荧光光密度CAO组显著高于sham组(心房肌平均光密度值增加59%,P<0.01;心室肌增加27%,P<0.01)。(5)糖尿病大鼠OFQ荧光光密度:神经节:糖尿病CAO组(238.79±1.3)荧光光密度高于正常大鼠组(235.06±2.11),P<0.05;心房:糖尿病sham组(237.98±1.03)荧光光密度高于正常大鼠组(235.87±0.66),P<0.05;糖尿病CAO组(240.57±0.69)荧光光密度显著高于正常大鼠组(235.87±0.66),P<0.01;心室:糖尿病CAO组(245.07±1.07)荧光光密度显著高于正常大鼠组(239.65±1.56)和糖尿病sham组(240.31±0.7),P均<0.01。(6)糖尿病大鼠NE荧光光密度:神经节:糖尿病sham组(235.98±2.08)和CAO组(237.75±1.29)荧光光密度显著高于正常大鼠组(222.98±4.6),P均<0.01;心房:糖尿病sham组(230.45±0.82)和CAO组(236.44±2.66)荧光光密度显著高于正常大鼠组(218.44±4.10),P均<0.01;心室:糖尿病sham组(236.07±1.82)和CAO组(240.31±1.08)荧光光密度显著高于正常大鼠组(230.46±2.67),P均<0.01。3、ELISA结果显示:正常大鼠(1)结扎冠脉后30min,CAO组心房和左心室表达Ach均下调(心房:sham组为32.75±1.66nmol/L,CAO组28.38±4.57nmol/L,P<0.05;心室:sham组为49.22±7.62nmol/L,CAO组为40.08±3.99nmol/L,P<0.05);(2)结扎冠脉后30min,CAO组心房和左心室表达OFQ均上调(心房:sham组为1.33±0.10pg/ml,CAO组为1.55±0.14pg/ml,P<0.05;心室:sham组为1.4±0.10pg/ml,CAO组为1.55±0.16pg/ml,P<0.05)。DM大鼠(1)OFQ:糖尿病组比其溶剂对照组OFQ含量升高,辣椒素干预组与糖尿病组及溶剂对照组相比OFQ含量均升高,缺血后各组OFQ均升高。其中:糖尿病组比其对照组升高(心房无差异,心室sham25%、CAO14%);辣椒素干预组比糖尿病组升高(心房sham1.3%,CAO2.4%;心室sham11.2%,CAO17.7%);辣椒素干预组比其对照组升高(心房sham5.3%,CAO7.2%,心室sham38%,CAO0.8%);CAO组OFQ含量比sham组增高(各组依次为:心房3.8%、5%、2.1%、3.1%、3.2%;心室9.7%、16.2%、20.1%、47.4%、2%)。(2)NE:糖尿病组比其溶剂对照组NE含量升高,辣椒素干预组NE含量低于DM组,缺血后各组NE高于假手术组。其中:糖尿病组NE含量比其对照组增高(心房sham5.1%,CAO无差异;心室sham49%,CAO5%);辣椒素干预组NE含量比糖尿病组降低(心房sham组11.55%,CAO组0;心室sham组2.04%、CAO组22.7%);辣椒素干预组NE含量比其溶剂对照组增高(心房sham9.4%,CAO无差异;心室sham24%,CAO无差异)结扎冠脉后各组NE含量均升高(各组依次为:心房8.6%、21.4%、13.9%、2.8%、20%;心室37.4%、14.1%、95%、40.2%、53.6%)。结论心脏神经节内存在单独表达Ach与OFQ的细胞和Ach与OFQ共表达细胞。Ach和OFQ阳性细胞还见于大血管壁、脂肪组织及心肌间。急性心肌缺血30分钟,OFQ表达细胞增多而Ach表达细胞减少;心肌组织表达OFQ上调而表达Ach下调。结果提示,Ach和OFQ表达于心脏神经节细胞和心肌组织,可能共同参与了急性心肌缺血早期病理过程。糖尿病大鼠急性心肌缺血早期,心脏神经节、心房和心室OFQ表达上调和心室肌NE表达上调。小剂量的辣椒素可上调心室肌OFQ表达和下调心室肌NE的表达,提示,这些因素均参与了糖尿病大鼠急性心肌缺血早期的病理过程。