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致病性大肠杆菌是兽医临床上最常见的病原菌,给畜牧业的发展造成严重的危害。随着抗菌药物的广泛使用,细菌耐药性问题日益严重。因此了解重庆地区规模化猪场致病性大肠杆菌的耐药性水平,研究质粒、外膜蛋白、整合子在猪场致病性大肠杆菌中的存在频率,分析其携带的耐药基因盒及与细菌耐药谱之间的关系,为控制致病菌的耐药性传播提供科学依据。
本研究采用WHO推荐的纸片扩散法,按NCCLS(2008)判定标准,检测了134株分离自规模化猪场的致病性大肠杆菌对18种常用抗菌药物的耐药性,分析致病性大肠杆菌对各种抗菌药物的耐药率及多重耐药情况。试验结果表明:所有致病性大肠杆菌均表现多重耐药,对青霉素100％耐药,对林可霉素、四环素、氨苄西林的耐药率超过90％,对阿莫西林、链霉素、利福平、卡那霉素、庆人霉素、甲氧苄啶、壮观霉素、红霉素的耐药率也较高,对头孢曲松、头孢哌酮的的耐药率相对较低。耐药谱多集中在耐10种药物到14种药物之间。所分离致病性大肠杆菌对抗菌药物存在严重的耐药性,耐药谱不断增加,其耐药性亦不断发生变迁。
通过转化实验获得两株编码卡那霉素耐药性的质粒,药敏实验证实转化株确实获得了卡那霉素耐药性。利用PCR试验扩增外膜蛋白基因OmpF,124株大肠杆菌OmpF基因扩增阳性,其余10株缺失。试验结果表明:耐药质粒在细菌耐药性的传递过程中可以产生作用,但其发挥的作用地位等有待进一步探索:外膜蛋白的缺失可能与大肠杆菌耐药种类的增加有关系。
设计一种Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类整合酶基因(intI)的简并引物,应用PCR方法对临床分离的134株多重耐药的大肠杆菌进行整合酶基因检测。PCR技术检测整合子基因盒,应用DNA测序研究整合子插入耐药基因的情况。PCR产物的测序结果在GeneBank中进行序列比对分析。试验结果表明:134株大肠杆菌中有131株菌检测出整合酶基因,117株菌检测出基因盒插入区,其检出率分别为97.8％、87.3％。本试验检测的整合子所携带的耐药基因为dfrA12,dfrA17,aadA1,aadA4和sat-1,分别编码对甲氧苄啶,链霉素-壮观霉素和链丝菌素的耐药基因。
分析整合子与致病性大肠杆菌多重耐药性之间的关系发现:整合子与多重耐药之间有密切关系,单个菌株携带的耐药基因与表型之间没有对应关系,但整合子在耐药菌株之间的分布却比较集中,耐10种药物到耐14种药物之间的93株多重耐药菌株中,85株检测出整合子,检出率为91.4％。