本研究以次郎柿与上西早生柿两种甜柿组培苗叶片为外植体,通过对抗生素筛选条件和根癌农杆菌介导次郎柿与上西早生柿遗传转化条件的优化,建立了次郎柿与上西早生柿遗传转化体系,将ACC氧化酶的RNAi基因导入次郎柿与上西早生柿组培苗中,以期通过转基因的方法抑制ACC氧化酶的表达,提高跃变型果实的耐贮性能。主要取得以下研究结果:1次郎柿转基因体系的建立1.1研究了抗生素对叶片再生的影响,确定了适宜的抗生素浓度。通过次郎柿叶片及组培苗对抗生素的敏感性试验,结果表明:在抗性苗生长过程中,用200mg/L头孢霉素和30mg/L壮观霉素做为筛选转化抗性苗的筛选浓度。1.2次郎柿转基因工艺路线采用继代四年半的组培苗,取其顶端2～3片刚展开的嫩叶,从叶基部剪取4mm×4mm大小的叶片,叶背朝上,接种在DKW（1/2N）+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上;暗预培养4d后,用OD₆₀₀值为0.5的菌液浓度侵染叶片10 min,侵染时加入50 mg/L的乙酰丁香酮。将侵染后的叶片外植体,再转到DKW（1/2N）+ZT 1.0mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上共培养3d,之后移入DKW（1/2N）+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L的培养基上黑暗脱菌培养3d;最后转入DKW（1/2N）+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L+Sp 30 mg/L的培养基上光照选择培养,每25d继代一次。继代7～8次后转入DKW+ZT 1.0 mg/L+Sp 30 mg/L+Cef200 mg/L的培养基中。获得了次郎柿ACC氧化酶的RNAi转基因苗。经GUS染色及PCR检测得到27株转基因植株。2上西早生柿转基因体系的建立2.1研究了抗生素对叶片再生的影响,确定了适宜的抗生素浓度。通过上西早生柿叶片及组培苗对抗生素的敏感性试验,结果表明:在抗性苗生长过程中,用200mg/L头孢霉素和30mg/L壮观霉素做为筛选转化抗性苗的筛选浓度。2.2上西早生柿转基因工艺路线采用继代四年半的组培苗,取其顶端2～3片刚展开的嫩叶,从叶基部剪取4mm×4 mm大小的叶片,叶背朝上,接种在DKW（1/2N）+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上;暗预培养3d后,用OD₆₀₀值为0.3的菌液浓度侵染叶片10 min,侵染时加入100 mg/L的乙酰丁香酮。将侵染后的叶片外植体,再转到DKW（1/2N）+ZT 1.0mg/L+TDZ 0.5 mg/L的培养基上共培养4d,之后移入DKW（1/2N）+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L的培养基上黑暗脱菌培养3d;最后转入DKW（1/2N）+ZT 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+Cef200 mg/L+Sp 30 mg/L的培养基上光照选择培养,每25 d继代一次。继代7～8次后转入DKW+ZT 1.0 mg/L+Sp 30 mg/L+Cef200 mg/L的培养基中。获得了上西早生柿ACC氧化酶的RNAi基因转基因苗。经GUS染色及PCR检测得到4株转基因植株。