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本文以研究喜树内生真菌性质特点为基础,采用微生物发酵法对十株喜树内生真菌进行了液体培养研究,从中筛选出产喜树碱或羟喜树碱的内生真菌。旨在于利用丰富的微生物资源来寻找喜树碱的新药源,为放大化微生物发酵工业生产喜树碱和喜树内生真菌提供理论依据,并为能从中筛选出具有药用价值的活性物质等奠定了基础。我国作为一个发展中的大国,随着工业化、城镇化和人口老龄化进程不断加快,由于人们自身不良生活方式和习惯,以及环境污染等一系列问题的存在,使得患癌人数不断激增,癌症已经成为我国居民的常见致死原因之一。如今,随着不断新开发出有效抗癌药物,同时加上治疗技术日益发展和改进,使得在癌症众多治疗途径中,药物治疗成为颇具开发潜力的一种。喜树碱最早是由Wall等人在1966年从我国特有植物喜树中,分离而得的一种生物碱,其抗癌活性非常强。近几年,虽然喜树碱及其衍生物的化学合成方法不断推陈出新,但大多依然存在着开发难度高、研制周期长、耗资多、成功率低等一系列问题。因此,我们尝试研究出更高效及实用的新方法,以获得喜树碱及其衍生物。本次试验所得结论为:(1)高效液相色谱法测定条件为:流动相为乙腈:水(v/v)=70:30,C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流速为1mL/min,喜树碱的检测波长为256nm,羟喜树碱的检测波长为266nm,每次进样量为20μL。由于此阶段仅为定性,故选择使用反相高效液相色谱切换波长法,对喜树碱、羟喜树碱同时测定,从而缩短检测时间,提高检测效率。(2)本文通过利用高效液相色谱法,测定十株喜树内生真菌液体培养的代谢产物,初步筛选并确定有七株内生真菌提取物表现出喜树碱或羟喜树碱的特性,其中四株菌株产喜树碱和羟喜树碱,而两株只产羟喜树碱,一株仅产喜树碱。(3)在此基础上,对其中一株可产喜树碱和羟喜树碱的菌株,更换液体培养基后,再次进行连续培养,发现振荡培养第六天的喜树碱含量最高,振荡培养第十二天羟喜树碱含量最高;同时发现发酵液中喜树碱、羟喜树碱含量均高于菌丝体中喜树碱、羟喜树碱的含量。