【摘 要】
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背景皮肤作为人体最大的器官,具有重要的屏障保护功能。增殖期是皮肤创伤愈合的重要时期,该时期表皮的再上皮化过程对恢复受损皮肤的完整性起到关键作用。再上皮化中最重要的是角质形成细胞的迁移以完成创面覆盖,而细胞的迁移过程离不开细胞骨架的变化。Rho GTPase家族是调节细胞骨架的关键蛋白,其家族成员RhoA、Rac1和Cdc42,分别调控细胞肌动蛋白应力纤维、片状伪足及丝状伪足。microRNAs（m
【基金项目】
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国家自然科学基金（81073417）； 国家自然科学基金（81872514）；
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背景皮肤作为人体最大的器官,具有重要的屏障保护功能。增殖期是皮肤创伤愈合的重要时期,该时期表皮的再上皮化过程对恢复受损皮肤的完整性起到关键作用。再上皮化中最重要的是角质形成细胞的迁移以完成创面覆盖,而细胞的迁移过程离不开细胞骨架的变化。Rho GTPase家族是调节细胞骨架的关键蛋白,其家族成员RhoA、Rac1和Cdc42,分别调控细胞肌动蛋白应力纤维、片状伪足及丝状伪足。microRNAs（miRNAs）作为一类非编码小RNA,在皮肤创伤愈合过程发挥着重要作用。通过Targetscan软件初步预测发现Rho GTPase家族成员Rac1和RhoA是miR-200家族成员miR-200b/c的潜在靶标基因。业已证明miR-200家族参与皮肤的毛发形成,miR-200c成员在正常创缘处表达下调,在年老皮肤创缘处高表达,但其对皮肤创伤愈合的具体机制尚未阐明。TGF-β作为参与创伤愈合的重要细胞因子,具有调控创伤再上皮化EMT样表型的作用,并且Rac1相关的信号通路是TGF-β诱导转化角质形成细胞EMT的重要介质,但是关于miR-200是否通过靶向Rho GTPase家族参与TGF-β介导的皮肤创伤EMT样过程尚未见报道。目的本研究聚焦miR-200b/c与Rho GTPase家族,探讨miR-200b/c调控皮肤创伤愈合的机制,为临床寻找microRNA介导的皮肤创伤治疗靶点提供可能。方法本研究利用小鼠背部皮肤创伤模型,生物信息学分析miR-200b/c与Rho GTPase是否具有潜在靶向性;利用RT-qPCR和Western Blot检测正常皮肤创伤组织中miR-200b/c与Rho GTPase家族的相关性;利用萤光素酶报告基因验证miR-200b/c与靶基因的直接靶向性;利用过表达miR-200b/c的模拟物mimics注射小鼠创口处,观察miR-200b/c对皮肤创伤愈合的影响;H&E、K14染色观察创口再上皮化情况;利用HaCaT细胞划痕实验模拟体外创伤愈合,RT-qPCR和Western Blot检测角质形成细胞中miR-200b/c与Rho GTPase的表达相关性;Western Blot检测在角质形成细胞过表达miR-200b/c后Rho GTPase蛋白表达变化;利用RT-qPCR在动物和细胞水平检测TGF-β与miR-200b/c的表达相关性;利用免疫荧光和鬼笔环肽染色检测角质形成细胞中过表达miR-200b/c后TGF-β介导的创伤EMT样表型。结果1.本研究中,我们发现表皮富集的miR-200b/c与调控细胞骨架片状伪足的关键蛋白Rac1在小鼠皮肤创伤愈合过程中表达呈负相关性;miR-200b/c直接靶向Rac1抑制其蛋白表达。2.过表达miR-200b/c使小鼠皮肤创伤愈合明显延迟;miR-200b/c有效抑制角质形成细胞Rac1的表达和细胞迁移。3.小鼠皮肤创伤组织再上皮化过程中TGF-β1表达升高;TGF-β1有效抑制miR-200b/c的表达;TGF-β1通过抑制miR-200b/c靶向Rac1的信号,诱导角质形成细胞出现EMT样表型变化,调节再上皮化过程。结论本研究结果表明,miR-200b/c直接靶向Rac1 3’UTR,在角质形成细胞中抑制Rac1表达,抑制皮肤创伤愈合;TGF-β1通过减缓miR-200b/c对Rac1的靶向抑制,调控创伤再上皮化EMT样过程,从而维持皮肤创伤愈合的稳态。
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目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是由中脑黑质致密部及纹状体部位的多巴胺能神经元病变引起的一种神经退行性疾病。虽然PD的病因尚未完全清楚,但线粒体功能障碍及脑内氧化应激增强引起的多巴胺能神经元病变被认为是PD发生发展的主要因素之一。因此,改善线粒体功能障碍及阻断氧化应激诱导的多巴胺能神经元损伤的神经保护剂可能有助于延缓PD的进展。运动功能是由传递到纹状体的多巴胺能神经元
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