两种中药免疫增强剂对鸡的免疫调节作用及鸡IL-10基因原核表达

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:tiantianle_a
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免疫抑制病是当今危害养禽业发展的重要疾病,如,传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡马立克病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽白血病病毒(ALV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽流感病毒(AIV)、呼肠孤病病毒(REOV)、出血性肠炎病毒(HEV)、腺病毒、隐孢子虫、曲霉素、黄曲霉素、镰刀菌等,给养殖业带来了严重的经济损失,而细胞因子的检测在免疫抑制病的预防、控制及治疗过程中有着非常重要的临床意义和参考价值。第一部分试验,选取60只健康7日龄SPF雏鸡,随机分为四组,分别命名为A1、A2、A3、A4,每组15只鸡,5只鸡一个重复,共设三个重复,其中,A1为空白对照组,A2、A3、A4三组在21日龄接种法氏囊病毒,A3组雏鸡于25日龄至29日龄在饲料中添加沈氏免疫增强剂1.2g/kg,A4组雏鸡于25日龄至29日龄注射乌梅黄酮0.2ml/只,在攻毒前21日龄、25日龄、32日龄、46日龄、60日龄分别于SPF鸡翅下静脉采集血液,分离血清,测定血清中IL-4、IL-10、TGF-β和IFN-γ含量,每组随机测定4只鸡。第二部分试验,选取60只健康7日龄SPF雏鸡,随机分为四组,分别命名为B1、B2、B3、B4,每组15只鸡,5只鸡一个重复,共设三个重复,其中,B2、B3、B4三组在11日龄和25日龄接种ND活疫苗免疫,B1组为空白对照组,B2组在21日龄接种法氏囊病毒,B3组雏鸡于25日龄至29日龄在饲料中添加沈氏免疫增强剂1.2g/kg,B4组雏鸡于25日龄至29日龄注射乌梅黄酮0.2ml/只,在攻毒前21日龄、25日龄、32日龄、46日龄、60日龄分别于SPF鸡翅下静脉采集血液,分离血清,测定血清中IL-4、IL-10、TGF-β和IFN-γ含量,每组随机测定4只鸡。第三部分,本试验根据Genebank上登录的鸡IL-10基因序列对SPF鸡IL-10基因进行克隆及原核表达,并对其进行序列分析和生物信息学分析。结果表明:免疫增强剂对SPF雏鸡免疫抑制病的调节作用:雏鸡在感染IBDV后,处于免疫抑制状态,其血清中IL-4、IL-10、IFN-γ和TGF-β在感染后含量出现不同程度的上升;沈氏免疫增强剂和乌梅黄酮注射液对IBDV引起的雏鸡免疫抑制有很好的疗效,可以有效预防和治疗雏鸡免疫抑制病。免疫增强剂对疫苗的增强作用:沈氏免疫增强剂和乌梅黄酮注射液对雏鸡血清中IL-4的含量有一定的影响;沈氏免疫增强剂和乌梅黄酮注射液对雏鸡血清中IL-10的分泌产生了抑制作用,降低了血清的含量;沈氏免疫增强剂和乌梅黄酮注射液对雏鸡血清中IFN-γ和TGF-β含量影响不明显。SPF鸡IL-10基因的克隆:(1)从SPF鸡外周血液分离培养的淋巴细胞中扩增出IL-10基因;(2)通过对IL-10基因序列分析表明,鸡IL-10基因与其他动物同源性较低,可以认为是一个独立的亚群。生物信息学分析表明,IL-10信号汰切割位点能在15位与16位之间, IL-18基因编码的蛋白具有疏水性,具有很强的抗原性,IL-10蛋白分子中至少含有8个α-螺旋、12个β-折叠。鸡IL-10基因有6个O型糖基化修饰位点,而没有N型糖基化修饰位点;(3)成功构建了pET32a-IL-10原核表达重组质粒,经测序鉴定阅读框正确的阳性重组菌通过IPTG诱导表达后,获得约38.2ku的表达产物,表达产物的分子量大小与根据IL-10氨基酸序列推导的蛋白与pET标签形成的融合蛋白大小符合。
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