功能负荷改变对兔髁突软骨中BMP-2表达的影响

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目的颞下颌关节病(temporomandibular disorders, TMD)是颞下颌关节的一种常见、多发病,咬合改变是诱发TMD的重要病因之一,本实验建立功能性负荷改变的实验动物模型,研究咬合改变对双侧颞下颌关节髁突软骨的影响;应用免疫组化的方法观察BMP-2在髁突软骨的表达及变化,以探讨BMP-2在功能负荷改变对兔髁突软骨改建中的影响。方法24只青春发育期(约2月龄)新西兰白兔随机分为实验组和对照组4个实验点。适应性饲养1周后,建立功能负荷改变的模型。实验组:采用速眠新Ⅱ(2~4 ml/kg)(军需大学兽医研究所)肌肉注射实验组,用手机均匀磨除兔上下切牙各2mm,3d/次,并保证没有露髓,随时观察咬合情况。同龄对照组兔只做麻醉,不作其他处理,实验组和对照组兔分别在实验2、4、6、8周后,每组处死3只并取材。建立兔功能负荷改变的动物模型,所有动物混合饲养正常颗粒饮食。固定、脱钙、包埋后制作组织切片,进行HE染色,观察不同时间段动物的颞下颌关节髁突的组织学变化,应用免疫组织化学SABC方法检测髁突软骨中BMP-2的表达,并通过计算阳性细胞数目来探讨BMP-2在不同实验时间点的表达变化情况。结果1.所有动物安全度过操作,能够正常进食颗粒饲料,成功建立兔功能负荷改变的动物模型。2.光镜观察:对照组兔颞下颌关节髁状突软骨由浅至深分为纤维层、增殖层、肥大层、钙化层,各层细胞相互移行,排列有序,软骨基质与骨小梁自然延伸,实验组髁突软骨纤维层可出现疏松,增值层细胞排列不整齐,局部出现裂隙,肥大层细胞体积增大,排列紊乱。3.免疫组化:正常兔髁状突的增殖层、过渡层和肥大层软骨细胞均可见BMP-2的表达。兔左、右侧髁突软骨中BMP-2的表达无明显差异(P>0.05),故将双侧合并统计。对照组兔髁突软骨中BMP-2表达随着青春发育期呈渐进性增长。前部:实验组各时间点与对照组相比髁突软骨前部BMP-2阳性细胞数无明显差异(P>0.05)。中部:实验组2周髁突软骨前部BMP-2较同龄对照组阳性细胞数无明显差异(P>0.05):实验组4、6、8周髁突软骨中部BMP-2较同龄对照组高表达(P<0.05)。后部:第2周髁突软骨后部BMP-2较同龄对照组高表达(P<0.05);第4周组髁突软骨后部BMP-2较同龄对照组阳性细胞数无明显差异(P>0.05);第6、8周髁突软骨后部BMP-2较同龄对照组低表达(P<0.05)。结论1.功能负荷改变可以引起颞下颌关节髁突软骨的组织学改变,可以建立兔功能负荷改变的动物模型,为临床研究提供理论依据。2.BMP-2参与了因功能负荷改变引起的髁突软骨的改建活动。
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