【摘 要】
:
目的:在构建了重组工程菌BL21(DE3)/PET-3C/aSAIF-SUMO的基础上,对重组鲨鱼血管抑制因子(aSAIF)的高密度发酵条件及中试纯化工艺进行优化,初步探讨其抑制肿瘤生长及血管生成的机制
论文部分内容阅读
目的:在构建了重组工程菌BL21(DE3)/PET-3C/aSAIF-SUMO的基础上,对重组鲨鱼血管抑制因子(aSAIF)的高密度发酵条件及中试纯化工艺进行优化,初步探讨其抑制肿瘤生长及血管生成的机制。方法:在5L发酵罐中进行工程菌培养,优化IPTG诱导浓度及时间点。利用离子交换层析和镍柱亲和层析对带有组氨酸标签的重组鲨鱼血管抑制因子融合蛋白His-SUMO-aSAIF进行纯化,并在纯化过程中尝试以HPLC监测aSAIF-SUMO融合蛋白纯化流程。纯化后的融合蛋白进行小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)酶切,切除了SUMO蛋白后的非融合aSAIF经镍柱二次亲和层析获得,并进行血管抑制活性检测、流式检测细胞凋亡及周期情况、基因表达谱芯片分析等。结果:确立工程菌发酵罐培养的IPTG诱导时间点为接种3小时后,诱导浓度为1mmol/L。优化后的纯化工艺参数为:离子交换层析采用0.2mol/L NaCl进行洗脱;亲和层析则采用250mmol/L咪唑进行洗脱;SUMO蛋白酶与融合蛋白的最佳酶切比例为1:480,酶切时间为1h。最终获得的aSAIF蛋白纯度可达95%,并证实其具有抑制血管生成的生物学活性,但可能并非通过促进细胞凋亡或周期变化发挥作用,通过表达谱芯片初步筛选出一部分差异基因,发现其主要聚集于细胞运动、细胞发育、细胞生长与增殖、细胞凋亡等生物学过程,并集中在细胞装配与组织、骨骼肌肉系统发育及功能和细胞间信号与作用的调控网络。结论:已成功建立aSAIF的发酵和纯化工艺,并由基因芯片分析筛选出其调控的潜在基因及生物学进程,为后续大规模生产及机制研究奠定基础。
其他文献
随着城市地下空间的开发利用,地下室抗浮成了工程师们不得不面对的问题。论文结合工程应用实例,对大兴凯德MALL商业建筑的地下室抗浮设计进行探讨,分析比较了抗浮锚杆与抗浮
<正>3月29日,在国土部公布的一系列数据报告中,首次公布了"租价比"指标。报告显示,北京、上海、深圳等一线城市的住宅市场已经出现了严重泡沫。国土部相关负责人解释,租价比
<正>一、党政领导干部选拔任用制度的历史考察党在革命战争时期已着手开展革命领导干部的选任工作。新中国成立后,由于政权建设等原因,党政领导干部的选拔任用表现出高度集权
<正>垃圾填埋场中,手机和电脑等电子垃圾中的重金属会渗入土壤、河流或地下水造成污染。科学报告(Scientific Reports)在2017年7月27日发表的一项研究称,美国莱斯大学的研究
辨证论治是中医学的核心内容,也是指导临床诊断和治疗疾病的基本原则,"异病同治"就是在此原则指导下产生的。基于"异病同治"这一治则,主要阐述桂枝茯苓丸对于慢性盆腔炎、卵
复杂性科学是一门近年来新兴起的交叉学科 ,发展迅速。而金融系统是人类创造的最为复杂的系统之一 ,因此 ,金融系统是复杂性科学最重要的研究方向。本文论述金融系统的复杂性
目的:通过与YSI-1500型血糖仪(YSI)的比较,评价罗氏卓越型血糖仪(罗氏)是否能用于测定异麦芽酮糖(Iso)的血糖指数(GI)。方法:分别用罗氏和YSI测定服用50 g葡萄糖(Glu)或Iso后2 h的血糖
为解决火电厂锅炉给水系统中由于落后的人工控制加药而造成汽轮机的凝汽器空抽区铜管等处氧化腐蚀 ,设计了基于 PLC的电厂锅炉给水加药自动控制系统 ,阐述了该系统的工作原理
在对已有企业生命周期阶段模型进行梳理的基础上,重点分析了文献中出现的管理熵法、产业增长率法和现金流法3种常用的企业生命周期划分方法,并在此基础上,运用中国沪深两市上
用p-V图象速解水银注排问题何海明(浙江绍兴市东湖中学,312000)热学中有一类关于水银的注排问题,其物图1理模型可归结为:总长为L0厘米、横截面均匀的玻璃管,一端封闭,一端开口,开口向上竖直放置.与