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第一部分人重组TRAIL诱导胆囊癌细胞凋亡作用的研究目的研究人重组TRAIL(recombinant human TNF related apoptosis inducing ligand，rhTRAIL)对胆囊癌细胞株SGC-996和GBC-SD的诱导凋亡作用。方法绘制不同浓度rhTRAIL作用于胆囊癌细胞株SGC-996和GBC-SD后生长曲线，计算半数抑制浓度(IC50)；以相差显微镜下细胞形态观察、凋亡效应蛋白酶Caspase 3、7的活性检测和流式细胞仪Annexin V-PI染色后凋亡细胞比例测定三种方法观测细胞凋亡状况。结果rhTRAIL作用于胆囊癌细胞株SGC-996和GBC-SD三天后的半数抑制浓度(IC50)分别为245.8 ng／ml和270.2ng／ml；rhTRAIL作用后，胆囊癌细胞SGC-996、GBC-SD胞膜出现皱缩，凋亡效应蛋白酶caspase 3、7的活性明显升高，细胞凋亡比例显著上升。结论rhTRAIL对胆囊癌细胞生长有抑制作用，其作用是通过诱导胆囊癌细胞凋亡实现的，且呈剂量依赖性。第二部分胆囊癌中c-FLIP的表达状况及其对人重组TRAIL诱导的细胞凋亡影响目的检测人胆囊癌组织和细胞株中细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素—1β转换酶抑制蛋白(cellular Fas-associated death domain-like interleukin-1 converting enzyme inhibitory protein，c-FLIP)的表达水平，了解c-FLIP表达状况对rhTRAIL诱导的胆囊癌凋亡的影响。方法收集35例胆囊癌石蜡切片和同期10例胆囊腺瘤、10例正常胆囊组织的石蜡切片作为对照。以免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白—过氧化物酶(S—P)法半定量测定其c-FLIP表达状况；化学合成法合成SiRNAc-FLIP干扰片断，以抑制c-FLIP表达；检测SiRNA干扰c-FLIP表达联合rhTRAIL作用后，胆囊癌SGC-996和GBC-SD细胞凋亡状况。结果c-FLIP在胆囊癌组织中阳性表达26／35(74.2％)，显著高于其在胆囊腺瘤组织2／10(20％)和正常胆囊组织中1／10(10％)的表达水平；SiRNA有效降低了c-FLIP表达水平；SiRNA干扰c-FLIP表达联合rhTRAIL作用后，胆囊癌细胞凋亡状况明显高于对照各组。结论胆囊癌组织中，c-FLIP的表达明显高于其在胆囊腺瘤和正常胆囊组织中的表达。SiRNA可以有效抑制c-FLIP的表达水平，进而显著增强rhTRAIL对胆囊癌的诱导凋亡作用。第三部分人重组TRAIL联合塞来昔布增强rhTRAIL诱导胆囊癌凋亡的作用研究及其机制探讨目的经体内、外实验观察rhTRAIL联合环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对胆囊癌的疗效，初步探讨产生疗效的机制。方法Western-blot检测塞来昔布作用于胆囊癌细胞株后，c-FLIP和死亡受体DR4、DR5表达状况；rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞株SGC-996后，细胞凋亡状况检测；建立裸鼠荷胆囊癌皮下移植瘤模型，联合给药两周后，测定皮下移植瘤体积、瘤重，计算抑瘤率，分析组间差异。结果塞来昔布作用于SGC-996细胞后，下调了c-FLIPs表达，上调了DR5表达，且呈浓度和时间依赖性。rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞后，细胞凋亡水平明显高于单独用药组和对照组；rhTRAIL联合塞来昔布作用于荷胆囊癌裸鼠皮下移植瘤，联合用药组移植瘤体积增长明显受抑制(P＜0.05)：联合用药组抑瘤率(23.3％)高于rhTRAIL单药组(14.3％)和塞来昔布单药组(15.5％)；但移植瘤瘤重测定显示组间差异则无统计学意义(P＞0.05)。结论塞来昔布通过下调c-FLIPs表达和上调DR5表达，显著增强了rhTRAIL诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡的作用。rhTRAIL联合塞来昔布较单独用药组更能抑制荷胆囊癌裸鼠皮下移植瘤的生长，其作用价值值得进一步探讨。