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目的:恶性淋巴瘤是血液系统常见的恶性肿瘤,目前发病率呈逐年增高的趋势,但治疗仍然是以传统化疗结合放疗为主要治疗手段,容易发生复发和耐药,并可能引起治疗相关性肿瘤的发生,这些均可能影响淋巴瘤患者的治疗效果和长期生存。因此,需要寻找一种更为安全、有效、经济的新药来预防和治疗恶性淋巴瘤并提高、改善患者的预后和生活质量。近年来许多研究表明环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)在多种肿瘤中呈过度表达,并且高表达的COX-2与肿瘤的发生发展密切相关。进一步研究表明非甾体类抗炎药(Nonsteroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)特别是选择性COX-2抑制剂对多种肿瘤具有抑制作用,可降低肿瘤的发生率并预防肿瘤的形成,抑制肿瘤复发和全身转移。塞来昔布是COX-2的选择性抑制剂,作为非甾体类抗炎镇痛药物在临床上广泛使用于各种骨关节疾病,近年来许多研究显示塞来昔布尚具有广谱而高效的抗肿瘤作用。因此研究塞来昔布对恶性淋巴瘤的影响及效应机制对于淋巴瘤的临床治疗非常有意义。Bcl-2是在人滤泡淋巴瘤染色体t(14;18)(q32;q21)易位断裂点上发现的一个原癌基因,定位于人染色体18q21。Bcl-2蛋白的功能是抑制细胞凋亡,延长细胞寿命,增加细胞对各种凋亡刺激因素的抗性,但不影响细胞的分裂与增殖。近年来,COX-2及其抑制剂与肿瘤的发生、发展与凋亡关系的研究比较多,但有关COX-2抑制剂对淋巴瘤细胞及抗凋亡基因Bcl-2的影响的文献报道国内外都很少见。本实验通过体外培养人滤泡淋巴瘤Namalwa细胞系,观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对Namalwa细胞增殖、凋亡及细胞周期分布的影响,并检测不同浓度的塞来昔布作用后Bcl-2 mRNA在细胞中的表达情况,初步探讨塞来昔布对恶性淋巴瘤的作用及其抗肿瘤的可能作用机制,为塞来昔布应用于淋巴瘤的临床治疗提供理论依据。方法:体外培养人滤泡淋巴瘤Namalwa细胞,用不同浓度的塞来昔布进行干预。应用MTT比色法检测细胞生长状况;流式细胞术(FCM)分析塞来昔布对细胞周期的影响;AnnexinV -FITC/PI双标法检测塞来昔布对Namalwa细胞凋亡的影响;应用RT-PCR法检测细胞中Bcl-2 mRNA的表达水平变化。所得结果运用SPSS13.0统计软件包处理,以α=0.05为显著性检验水准。结果:1.塞来昔布对Namalwa细胞的增殖抑制作用:塞来昔布各浓度组(20、40、80、120、160μmol/L)作用于Namalwa细胞24h后抑制率分别为4.11%、5.74%、9.30%、15.43%、16.68%;48h后抑制率分别为10.31%、11.04%、21.01%、28.48%、29.47%;72h后抑制率分别为11.30%、11.87%、28.82%、44.39%、43.33%。统计学分析显示,塞来昔布各浓度组分别作用Namalwa细胞24h、48h、72h后抑制率明显增加,各个时间点间比较,差异有显著性(P<0.05);各浓度组间比较,20μmol/L与40μmol/L浓度组间、120μmol/L与160μmol/L浓度组间抑制率无显著性差异(P>0.05),40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L浓度之间抑制率有显著性差异(P<0.05)。即在一定浓度范围内,随着作用浓度增加和作用时间延长,塞来昔布对Namalwa细胞有明显的增殖抑制作用。2.塞来昔布对Namalwa细胞的细胞周期的影响:塞来昔布各浓度组(0μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L)作用于Namalwa细胞48h后,塞来昔布各处理组G0/G1期细胞比例分别为(27.76±1.89)%、(42.85±0.25)%、(48.45±0.6)%、(51.63±1.97)%;S期细胞比例分别为(52.86±4.60)%、(43.65±2.12)%、(38.18±1.29)%、(34.47±0.71)%;G2/M期细胞比例分别为(18.87±0.49)%、(15.98±1.15)%、(13.60±0.55)%、(11.07±0.23)%。统计学分析显示,随着塞来昔布浓度的增加,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞明显减少,细胞阻滞于G0/G1期。3.塞来昔布对Namalwa细胞凋亡的影响:塞来昔布各浓度组(40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L)作用于Namalwa细胞48h后凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为(14.48±2.18)%、(24.74±3.19)%、(31.60±4.83)%,对照组凋亡率为(4.82±0.58)%,经单因素方差分析,各浓度组间塞来昔布对细胞凋亡率的影响有显著性差异(P<0.05)。4.塞来昔布对Namalwa细胞Bcl-2 mRNA表达的影响:RT-PCR检测结果显示,塞来昔布浓度为0μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L的各处理组作用Namalwa细胞48h后Bcl-2 mRNA的相对表达量分别为0.92±0.031、0.81±0.04、0.71±0.042、0.57±0.051。随着塞来昔布浓度的增加,Bcl-2 mRNA的相对表达量逐渐降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论:1塞来昔布对Namalwa淋巴瘤细胞具有明显的生长抑制作用,并呈时间和浓度依赖性。2塞来昔布使Namalwa细胞G0/G1期细胞数增多,S和G2/M期细胞数减少,使细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制Namalwa细胞的增殖。3塞来昔布可以诱导Namalwa细胞凋亡。随着塞来昔布浓度的增大,凋亡细胞数增多,呈浓度依赖性。4塞来昔布可抑制Namalwa淋巴瘤细胞中Bcl-2 mRNA的表达,随着塞来昔布浓度的增大,Bcl-2 mRNA的表达降低,呈浓度依赖性。推测下调Bcl-2 mRNA的表达是塞来昔布诱导Namalwa细胞凋亡的机制之一。