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目的:观察PHI对骨髓瘤细胞株增殖、凋亡的作用,研究PHI对骨髓瘤细胞Notch信号通路及PI3K/Akt/Bcl-2信号通路的影响,阐述抑制增殖、诱导凋亡的分子机制。方法:含10%胎牛血清的RPMI1640培养基体外培养RPMI8226细胞和U266细胞,用Western blot方法及免疫细胞化学方法检测细胞上Notch信号蛋白的定位及表达情况。给予不同浓度的PHI和GSI分别处理瘤细胞24h、48h和72h,通过台盼兰测定细胞活力,MTT法检测细胞增殖抑制情况。利用DAPI染色,荧光显微镜观察细胞形态了解细胞凋亡情况。通过流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响。药物干预后提取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测Notch通路蛋白表达变化,以及下游磷酸化Akt及Bcl-2蛋白表达情况。酶联免疫吸附试验(Elisa)检测细胞分泌的VEGF变化情况。结果:与正常人淋巴细胞相比,Western blot和免疫细胞化学染色法检测骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞和U266细胞高表达Notch通路蛋白:在RPMI8226细胞中,Notch1蛋白主要表达于细胞膜和细胞核上,Jagged1蛋白主要定位于细胞膜上;而在U266细胞中,Jagged1表达于细胞膜上;与对照组相比,PHI及GSI分别处理后的RPMI8226细胞经DAPI染色后荧光显微镜下可见细胞核固缩、折叠,染色质高度凝聚,细胞核可裂解为碎片,产生凋亡小体;不同浓度的PHI和GSI作用于RPMI8226细胞后,细胞增殖水平明显下降(P<0.05),且对细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性。PHI作用于RPMI8226细胞后使细胞周期阻滞在G0/G1期。Western blot结果分析显示PHI和GSI作用于RPMI8226细胞后Notch1、Jagged1/2及下游蛋白p-Akt、Bcl-2表达明显下调(P<0.05);酶联免疫吸附试验结果分析显示PHI作用于RPMI8226细胞后细胞分泌VEGF水平明显下降(P<0.05)。结论:⑴.人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226和U266高表达Notch信号蛋白。⑵.用PHI和GSI均能体外抑制培养的骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,并使细胞阻滞于G0/G1期,这种增殖抑制作用在一定范围内具有时间-剂量依赖性。⑶.PHI和GSI体外显著抑制RPMI8226细胞中Notch1、Jagged1/2及下游蛋白p-Akt、Bcl-2表达水平,同时可导致细胞分泌VEGF能力下降。⑷.Notch信号可能作为新的治疗骨髓瘤的靶点,PHI作为天然化合物,是一种Notch信号抑制剂,是潜在的治疗骨髓瘤的药物。