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目的:分析MB组织与正常小脑组织中circRNA的表达谱,筛选目标circRNA并分析该circRNA的下游靶基因及目的蛋白,验证筛选出的circRNA＿103128对MB细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力以及凋亡情况等细胞表型的影响,从而证实circRNA＿103128通过调控miR-129-5p/SOX4信号通路影响髓母细胞瘤生物学功能。方法:1.提取MB与正常小脑组织的临床标本中的RNA样本,使用Arraystar Human circRNA Array V2芯片进行分析,检测样本中circRNA的相对表达量,随后将MB与正常小脑组织中circRNA表达量进行对比,从中筛选出差异性较大的circRNA＿103128作为实验对象,构建circRNA＿103128敲减细胞模型和空载对照模型,随后提取细胞模型的RNA,使用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）技术验证细胞模型中circRNA＿103128表达水平。2.构建可抑制circRNA＿103128且带有抗嘌呤霉素标记的慢病毒以及空载病毒,转染MB细胞系Daoy并使用嘌呤霉素进行筛选,敲低Daoy细胞系中circRNA＿103128的表达量,随后使用q RT-PCR技术验证Daoy细胞WT株、Daoy细胞SH株和Daoy细胞NC株的circRNA＿103128表达水平,最后通过细胞平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞凋亡流式实验,分别从增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞凋亡情况等方面验证circRNA＿103128表达量的改变是否会造成Daoy细胞生物学功能的改变。3.使用Arraystar基于Target Scan和miRanda的靶点预测软件预测可以与circRNA＿103128相互作用的下游micro RNA（miR-129-5p）,随后使用q RT-PCR技术验证circRNA＿103128对miR-129-5p的调控。4.在先前的实验中,我们以通过Targetscan、miRTarbase和miRDB等生信网站筛选出并使用蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）验证了miR-129-5p的下游目的基因-SOX4基因。在本实验中,我们将再次对比MB肿瘤组织以及正常小脑组织中SOX4蛋白的表达量,并进一步验证SOX4蛋白在Daoy细胞中是否受circRNA＿103128的调控,最后使用免疫荧光技术观察MB组织与正常小脑石蜡切片中SOX4的表达差异情况以再次验证先前结论。5.构建miR-129-5p的抑制剂抑制Daoy-SH株的miR-129-5p,构建Daoy-SH+Inhibitor株,观察能否逆转circRNA＿103128敲低后造成的Daoy细胞生物学功能改变,并验证下游SOX4蛋白的表达情况。6.使用Daoy-NC株与Daoy-SH株构建裸鼠皮下成瘤模型,观察、记录肿瘤生长情况并在处死模型裸鼠后称量肿瘤重量,验证circRNA＿103128是否在动物模型上依旧存在影响。结果:1.利用Arraystar Human circRNA Array V2芯片分析3对正常组织与MB肿瘤组织circRNA的相对表达量,共筛选出533个差异表达的circRNA,从中选取在MB组织标本中明显高表达的circRNA＿103128作为研究对象,随后再次用q RT-PCR技术进行验证,证实芯片预测结果,既MB组织中circRNA＿103128的表达量明显超过正常小脑组织,差异有统计学意义。2.转染慢病毒的Daoy-SH株细胞的增殖、迁移及侵袭水平较Daoy-WT株与Daoy-NC株均受到不同程度的抑制,而其凋亡水平增加。3.利用生物信息预测软件预测出的下游miR-129-5p基因的表达随着circRNA＿103128的敲低显著上升,证明circRNA＿103128确实可以参与miR-129-5p的调控。4.SOX4蛋白在肿瘤组织中明显高表达,免疫荧光实验也证实这一现象,并且在抑制Daoy细胞的circRNA＿103128表达情况后SOX4的表达也随之受到抑制。5.在使用miR-129-5p的抑制剂后,Daoy-SH株被抑制的恶性表型再次恢复,Daoy-SH+Inhibitor株的增殖、迁移及侵袭水平较Daoy-SH株增强,凋亡水平降低,且这些生物学功能与Daoy-NC株接近。6.在构建裸鼠皮下成瘤模型后1月后观察,相比于接种Daoy-NC株的裸鼠模型,接种Daoy-SH株的裸鼠的皮下肿瘤模型生长受到明显的抑制,再次验证了circRNA＿103128可以促进肿瘤的发生发展。结论:对比MB组织与正常小脑组织中的circRNA表达量,筛选出MB组织中明显高表达的circRNA＿103128作为实验对象,利用慢病毒构建circRNA＿103128下调的人MB细胞系Daoy细胞模型Daoy-SH株进行实验,发现circRNA＿103128可利用分子海绵机制与下游miR-129-5p相互作用,从而调节下游的SOX4蛋白在MB细胞中的表达量,下调circRNA＿103128后可使得Daoy细胞的增殖能力、迁移能力以及侵袭能力遭到抑制,同时诱导Daoy细胞凋亡。circRNA＿103128/miR-129-5p/SOX4这一调控通路或许可为今后MB的诊断与治疗提供新的方向。