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水貂阿留申病(Aleutian mink disease, AD)又称浆细胞增多症,是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus, ADV)引起水貂免疫系统絮乱,持续感染的慢性传染性疾病。阿留申病自发现以来,至今尚未研制出有效预防该病的疫苗,对国内外养貂业造成了巨大的经济损失,该病已成为危害养貂业的三大病毒性传染病之一。本研究针对现阶段水貂阿留申病检测方法的不足,对ADV VP2基因进行原核表达,进而建立起检测ADV抗体的间接酶联免疫吸附试验。主要内容包括以下几个方面：(1)参照GenBank上发表的ADV基因序列,利用生物学软件分析VP2基因后截取具有抗原表位的基因片段。设计特异性的引物,扩增目的片段的大小为620bp的,并与pMD18-T载体连接,构建重组质粒。构建后的重组质粒进行PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析,然后将正确的目的片段双酶切,连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,将重组质粒命名为pGEX-4T-VP2,同样经PCR、酶切鉴定及测序分析后,结果显示,目的片段成功克隆到表达载体中。(2)将构建的重组质粒pGEX-4T-VP2和空载体pGEX-4T-1分别转化到E.coli BL21中,37℃,1mol/L IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白的分子量为57kD,目的蛋白在诱导5h时蛋白的表达量达到最高,通过Western Blot检测,表达蛋白具有反应原性。采用重力流柱的纯化方法,对含有GST的融合蛋白平衡、结合、洗脱进行纯化,然后经SDS-PAGE电泳检测,得到单一的目的条带,大小与预期结果一致,表明成功纯化出了目的蛋白。(3)利用纯化好的融合蛋白作为抗原包被ELISA板,通过对抗原浓度、封闭液、待检血清、酶标二抗及底物反应条件的优化,建立了间接ELISA检测方法。间接ELISA检测的最佳反应体系：用1：200倍稀释的重组蛋白包被酶标板,37℃1h,4℃过夜,1%BSA,37℃封闭2h,待检血清1：100倍稀释,37℃作用1h,1：2000倍稀释的HRP标记的兔抗貂IgG,37℃作用1h,TMB底物缓冲液避光作用20min显色,终止反应后测定OD450值。同时进行了特异性、敏感性、重复性试验,取得了较好的效果。