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牛耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)为虎皮楠科(Daphniphyllaceae)虎皮楠属(Daphniphyllum)植物。辣蓼(Polygonum hydropiper L)为蓼科(Polygonaceae)蓼属(Polygonum)植物。枫蓼制剂是由牛耳枫及辣蓼这两味药材共同组成,属民间传统药方,具有活血散瘀,清热解毒的功效,临床上用于痢疾、急性肠胃炎、跌打肿痛等的治疗[1]。研究发现总黄酮是辣蓼与牛耳枫中的主要成分之一。本文首先建立了枫蓼药材中总黄酮及槲皮素含量测定方法,然后对枫蓼颗粒剂制备工艺进行了优化,其次对枫蓼颗粒剂进行了质量标准研究,最后初步考察了枫蓼提取液的药效学,旨在研制出安全、有效、质量可控的枫蓼制剂。具体研究内容如下:(1)枫蓼药材总黄酮及槲皮素含量测定方法的研究:以芦丁为对照品,采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色,以紫外分光光度法建立枫蓼药材中总黄酮含量的测定方法,绘制标准曲线,回归方程为y=12.57x-0.0047,R2=0.9997,表明在0.008~0.040mg/m L浓度范围内,线性关系良好;以高效液相色谱法建立枫蓼药材中槲皮素含量的测定方法,绘制标准曲线,回归方程为y=43215x-146476,R2=0.9995,表明在10~50μg/m L浓度范围内,线性关系良好。(2)枫蓼颗粒剂的制备工艺研究:采用单因素变量法筛选出最佳溶媒——乙醇,采用正交试验法优化最佳提取工艺为:10倍量65%的乙醇加热回流提取2次,每次60min,过滤,合并提取液;6000r/min离心10min,以总黄酮含量为指标,减压浓缩至密度为1.15~1.20(60℃)的浸膏,80℃真空干燥成粉;以吸湿性、粒度合格率、溶化性及外观为评价指标。采用正交试验法优化枫蓼颗粒剂的成型工艺为:85%乙醇作润湿剂,药物与辅料比例1:1.5,糊精与蔗糖比例3:2制软材,过14目筛,干燥温度60℃,14目筛整粒,并进行中间体的质量控制,所制颗粒各项指标均满足2010版中国药典要求。(3)枫蓼颗粒剂的质量标准研究:采用TLC法定性鉴别枫蓼颗粒中槲皮素,以正丁醇—十二烷基硫酸钠—正己烷—水—甲酸(0.63:0.27:0.1:3:0.2)为展开剂的分离效果最好,颗粒剂与槲皮素对照品在相同位置具有同样颜色的斑点;采用紫外分光光度法及高效液相色谱法分别对总黄酮及槲皮素进行定量分析,方法学考察结果显示该法准确度高,重复性强,可用作枫蓼颗粒质量标准方案。(4)枫蓼醇提取液药效学的研究:分别利用热板法、醋酸扭体法考察枫蓼制剂的镇痛作用;利用二甲苯致耳肿胀法、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性变化的影响考察枫蓼制剂的抗炎作用。结果显示,与生理盐水组比较:热板法:醇提液高剂量组15min痛阈值显著延长(P<0.05);醋酸扭体法:醇提液高、中剂量能显著降低小鼠的扭体次数(P<0.05);二甲苯致耳肿胀法:醇提液高剂量的肿胀抑制率显著增加(P<0.05);醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性影响:醇提液高、中剂量组吸光度显著性下降(P<0.05),能有效降低早期炎性组织液的渗出。(5)本研究表明:该颗粒剂的制备工艺具有科学性、合理性,质量标准有效、可控、成品质量稳定,乙醇提取液具有抗炎镇痛的药理作用。