论文部分内容阅读
目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人胰腺癌细胞PANC-1细胞增殖和细胞凋亡的影响及机制。
方法:
1、在体外培养人胰腺癌细胞PANC-1细胞,分别用不同浓度的去甲斑蝥素(NCTD):10μg/mlNCTD(N10组)、50μg/ml NCTD(N50组)、100μg/ml NCTD(N100组)以及对照组(N组)作用24、48、72小时后,用MTT法检测NCTD对各组细胞的增殖抑制率。
2、收取处于生长对数期的人胰腺癌细胞PANC-1细胞,经不同浓度的去甲斑蝥素(NCTD):10μg/ml NCTD(N10组)、50μg/ml NCTD(N50组)、100μg/mlNCTD(N100组)以及对照组(N组)作用24、48、72小时后,采用Annexin V-FITC/PI双标记,应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。
3、收集人胰腺癌细胞PANC-1细胞,经不同浓度的去甲斑蝥素(NCTD):10μg/mlNCTD(N10组)、50μg/ml NCTD(N50组)、100μg/ml NCTD(N100组)以及对照组(N组)作用24、48、72小时后,提取细胞总蛋白,用Western blot检测细胞的NF-κB活性表达。
结果:
1、不同浓度的NCTD10μg/ml NCTD(N10组)、501μg/ml NCTD(N50组)、100μg/ml NCTD(N100组)作用人胰腺癌PANC-1细胞作用24、48、72小时后,对人胰腺癌细胞PANC-1均有细胞增殖抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。在同一作用时间点,N10组、N50组和N100组细胞抑制率与对照组相比均有显著性差异。在同一NCTD浓度作用下,24、48和72小时组的细胞抑制率和对照组相比均有显著性差异。
2、不同浓度的NCTD10μg/ml NCTD(N10组)、50μg/ml NCTD(N50组)、100μg/ml NCTD(N100组)作用人胰腺癌PANC-1细胞作用24、48、72小时后,处于S期的细胞比例逐渐增多,而处于G0/G1期的细胞比例逐渐减少。同时,各组的细胞的早期凋亡率,随着药物浓度的升高而明显增加,各NCTD处理组与对照组相比均有显著性差异。
3、不同浓度的NCTD10μg/ml NCTD(N10组)、50μg/ml NCTD(N50组)、100μg/ml NCTD(N100组)作用人胰腺癌PANC-1细胞作用24、48、72小时后,Western Blot结果示,NCTD可明显下调PANC-1细胞中NF-κB的表达。各NCTD处理组与对照组相比均有显著性差异。
结论:去甲斑蝥素(NCTD)对人胰腺癌细胞PANC-1有明显的细胞增殖抑制作用。NCTD对人胰腺癌细胞PANC-1的增殖抑制作用与细胞周期阻滞和凋亡诱导有关。其中,NCTD的细胞周期阻滞和凋亡诱导作用可能与抑制NF-κB的表达有关。