梅岭霉素产生菌原生质体抗药性选育及检测方法的研究

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本文通过对梅岭霉素(Meilingmycin)产生菌南昌链霉221菌株的原生质体对链霉素致死浓度的测定,采用不同浓度的诱变剂NTG对菌株的原生质体进行诱变处理,诱变后的原生质体涂布在含有致死浓度链霉素的RM2再生平板上,获得大量的链霉素抗性基因(str)突变株.然后通过对突变株的筛选,获得梅岭霉素高产菌株74#,该菌株产梅岭霉素的能力比原始出发菌株提高了58.18﹪..通过统计学分析表明,菌株的抗药性与产素突变密切相关.建立了梅岭霉素产生菌原生质体筛选方法,为梅岭霉素高产菌株的选育进行了有益的尝试.采用L<,9>(3<4>)正交实验设计,寻找了梅岭霉素产生菌较佳的种子培养基条件:碳源2.4﹪,黄豆饼粉0.5﹪,酵母膏0.2﹪,KH<,2>PO<,4>0.14﹪.本文同时通过对梅岭霉素的高效液相色谱法(HPLC).紫外检测法(UV)和杀蚕生物活性检测法(BA)的研究,分别建立了梅岭霉素(HPLC)法、UV法和BA法.通过三种检测法之间的相关性回归分析,三种检测方法相互呈直线关系.12个不同发酵单位的梅岭霉素发酵样品,分别采用HPLC法、UV法和BA法进行梅岭霉素发酵单位检测,对结果的进一步分析表明:UV法与HPLC法相比测定误差6.28﹪;BA法分别与HPLC法和VU法检测结果相比,其误差分别为10.48﹪和3.95﹪.紫外检测法为梅岭霉素测定提供较快速、简便、准确的测定方法.
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