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本文旨在用HPPP的标准亚裔中国人参考血清,在同一实验室对同一血清样品分析的基础上,比较不同样品预分离方法及不同技术体系对血清蛋白鉴定结果的影响,客观评价各种技术策略的优缺点,确定最适用于血浆蛋白质组学研究的技术路线;同时整合各条技术路线的鉴定结果,构建中国人血清蛋白质表达谱。本研究重点应用2-DE策略策略系统分析人类正常血浆蛋白质组,并与另外两条血浆蛋白质组学研究常用技术路线,即整体蛋白预分离策略和“鸟枪法”策略的研究结果比较,共同构建中国人血清蛋白质表达谱。
血清经2-DE分离,共从胶上切下1128个可鉴定的蛋白点,其中318个蛋白点的串联质谱分析结果具有较高置信度,即其Mascot得分值>58,经去冗余后,共鉴定出78种不同的血清蛋白;从整体蛋白预分离策略鉴定非冗余蛋白179个;以及从“鸟枪法”策略,包括“在线”、“离线”蛋白鉴定策略和“离线-纳升级电喷雾”鉴定策略等分别鉴定非冗余蛋白131、224和330个。三种技术策略共鉴定出560种不同的高置信度血清蛋白,有37个蛋白同时被三种技术路线鉴定。
对比分析表明不同技术策略各有其优缺点,目前在进行蛋白质组学研究尤其是复杂生物样品的蛋白质组学研究时,只有联合使用多种技术策略,才能获得尽可能多和可信度高的蛋白质组信息。此外,通过血清蛋白色谱预分离或优化肽水平上的色谱分离效果有利于低丰度蛋白的鉴定;在血浆蛋白质组研究中,通过严格样品处理条件、提高质谱检测灵敏度及采取离线二维色谱模式来改善肽混合物的分离效果是改善蛋白鉴定结果的关键。