玉屏风散超微粉的制备、质量标准及对猪瘟抗体水平影响研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lin820306
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猪瘟是一种猪的强烈性接触性传染病,世界动物卫生组织将其列入OIE疾病名录,猪瘟对养猪行业造成了极大的冲击,被我国列为一类传染病。近年来研究表明玉屏风散,具有中药中的丙种球蛋白之称,是较强的中药免疫增强剂。中药超微粉碎技术采用现代科技将中药材或中药提取物超微粉化,能使药效提高的同时大大减少副作用,因此中药超微粉化在具有重要的意义。本研究拟将玉屏风散制备成超微粉,并对其物理性质进行研究,利用HPLC测定超微粉中升麻素苷的含量,最后研究其对猪瘟抗体水平的影响。实验选取质量较好的黄芪、白术、防风洗净、干燥,先分别制备出中药粗粉,然后取各种中药粗粉超微粉碎得各中药超微粉。取各种样品利用相关仪器进行粒度分布、比表面积、流动性和吸湿性测定。粒径及比表面积结果显示,中药粗粉粒径基本在50-100μm范围内,而中药超微粉粒径范围主要在1-10μ.m范围内,超微粉的比表面积比粗粉大数倍。流动性结果显示,超微粉的休止角与粗粉休止角比例大于1,表明超微粉流动性比粗粉小。吸湿性结果显示,在温度为25℃,相对湿度为75%的条件下,黄芪粗粉、黄芪超微粉和白术超微粉均在96h达到吸湿平衡,而白术粗粉、防风粗粉和防风超微粉均在120h才基本达到吸湿平衡。利用HPLC对所制备的超微粉中升麻素苷含量进行测定,检测波长为254nm,流动相为乙腈-水(30:70)。将浓度为100.0μg/mL,50.0μg/mL,25.0μg/mL,12.5μg/mL, 6.3μg/mL的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线。然后进行精密度、重现性和回收率实验,最后取3批样品进行含量测定。HPLC图结果显示,升麻素苷对照品保留时间9.2min左右,而样品在9.2min左右处也出现一个较好的峰形,并且基线平稳。标准曲线实验所得回归方程为Y=8879.65X-7823.36, r=0.99995(n=5),试验表明,升麻素苷对照品在6.3~100.0『g/mL范围内线性关系良好,最低检测量0.46μg/mL。精密度实验结果显示,升麻素苷对照品峰面积积分值RSD为0.92%,表明此方法精密度较好;重现性结果显示,样品的升麻素苷RSD为0.89%,表明重现性良好;回收率实验结果显示回收率达到97.52%,RSD为0.95%。含量结果显示,三批次的结果分别为0.82%、0.75%、0.79%,比相关一些玉屏风散普通颗粒中升麻素苷含量要高。实验选用65日龄三元杂交(D×L×Y)断奶仔猪50头,平均体重30公斤,同时注射猪瘟细胞苗每头2头份,随机分为5组:Ⅰ组基础日粮组加1%玉屏风散超微粉:Ⅱ组基础日粮加0.5%玉屏风散超微粉;Ⅲ组基础日粮加0.1%玉屏风散超微粉:Ⅳ组基础日粮加2%玉屏风散粉末;Ⅴ组基础日粮组。通过猪瘟免疫后7d、14d、21d、28d对抗体水平进行检测。结果显示,在免疫后7d,猪瘟抗体水平开始逐渐上升,在免疫后21d达到最高水平,然后缓慢下降。添加1%玉屏风散超微粉组、添加0.5%玉屏风散超微粉组、添加0.1%玉屏风散超微粉组以及添加2%玉屏风散粗粉组猪瘟抗体水平均显著高于对照组(P<0.05);添加1%玉屏风散超微粉组、添加0.5%玉屏风散超微粉组、添加0.1%玉屏风散超微粉组猪瘟抗体水平显著高于添加2%玉屏风散粗粉组(P<0.05);添加0.5%玉屏风散超微粉组猪瘟抗体水平显著高于添加1%玉屏风散超微粉组和添加0.1%玉屏风散超微粉组(P<0.05);添加1%玉屏风散超微粉组抗体水平高于添加0.1%玉屏风散超微粉组,但差异不显著(P>0.05)。结果表明:玉屏风散超微粉对猪瘟免疫有显著增强作用,添加量0.5%为最佳。以上实验结果表明,玉屏风散各味中药经过超微粉化后粒径减小,比表面积增加,流动性减小,吸湿性变强。HPLC图、精密度和回收率实验表明通过此方法可行。升麻素苷含量结果显示,三批次的结果分别为0.82%、0.75%、0.79%,比相关一些玉屏风散普通颗粒中升麻素苷含量要高。猪瘟抗体检测结果表明玉屏风散超微粉和玉屏风散粗粉均可显著增强猪群免疫功能,提高猪群猪瘟抗体水平,但超微粉效果更佳,且以0.5%添加量最佳。
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