普通大蓟马生防真菌筛选及BS-1作用机制与应用初探

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普通大蓟马[Megalurothrips usiatus(Bagnall)],属缨翅目 Thysanoptera 蓟马科Thripidae大蓟马属Megalurothrips。普通大蓟马虫体微小,繁殖能力强,常隐匿于花中为害,防治困难,是一种非常重要的农业害虫。普通大蓟马广泛分布于赤道附近的热带、亚热带国家和地区,其寄主广泛,其中大部分为豆科植物。近些年来,普通大蓟马己成为海南省重要经济作物虹豆[Vignaunguiculata(L.)Walp.]上的主要害虫,严重影响豇豆品质。目前,针对普通大蓟马的防治措施以化学防治措施为主,辅以一些物理防治措施。长期采用以农药为主的化学防治措施会带来抗药性、农药残留超标、环境污染等问题。而生物防治措施具有生产成本低,不污染环境,对人、畜安全等优点,近年来受到人们越来越多的关注。因此,对普通大蓟马生物防治措施的研究具有良好的应用前景和重大意义。本文的主要试验结果如下:1.本实验室选取了海南省豇豆主产区中的6个市县进行了普通大蓟马的采集,采用组织分离方法,对普通大蓟马的虫生真菌进行了分离鉴定,共分离到19株真菌,隶属于 5 个属,分别为 Isaria sp.、Penicillium sp.、Aspergullus sp.、Cladaxporism sp.、Fusarium sp.。通过对普通大蓟马进行致病力测定,筛选出一株具有良好致病力的菌命名为BS-1,经过鉴定为棒束孢属真菌:爪哇棒束孢Isaria jovanica。其对二龄若虫24h 的 LC50为 1.4×106个/mL,对成虫 72h 的 LC50为 6.92×106个/mL,96h 的 LC50为6.32×105 个/mL。2.本文通过光学显微镜与扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)相结合,研究生防真菌BS-1对普通大蓟马二龄若虫和成虫的侵染过程,结果表明BS-1在接触二龄若虫虫体6h后观察到侵染结构,24h完成对二龄若虫的侵染;对成虫,BS-1接触虫体6-8h时观察到侵染结构,72h内完成对成虫的侵染。3.通过对被BS-1侵染的普通大蓟马成虫体内抗氧化酶系活力的研究,发现BS-1侵染过程中,蓟马体内活性氧(ROS)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与过氧化物酶(POD)三种抗氧化物酶的活力、丙二醛(MDA)含量显著升高。BS-1处理组虫体内 ROS 含量最高为 4193.66 FLnmgprot-1(对照组 1392.37 FL·mgprot-1),T-SOD活力最高为0.34U·mgprot-1(对照组0.16 U·mgprot-1),Mn-SOD活力最高为0.252 U·mgprot-1(对照组 0.067 U·mgprot-1),CAT 活力最高为 0.243 U·gprot-1(对照组 0.196 U·gprot-1),POD 活力最高为 0.013 U·mgprot-1(对照组 0.009 U·mgprot-1),MDA 含量最高为 1.11μmol·g prot-1(对照组 0.27μmol·gprot-1)。4.通过高通量测序的方法,比较侵染与未侵染的普通大蓟马肠道微生物多样性,结果表明BS-1菌侵染会打破普通大蓟马消化道内微生物环境的动态平衡,益生菌群数量和种类急剧减少,病原菌和条件致病菌的含量急剧上升,蓟马体内微生物群落的组成由复杂多样变为简单、丰富度和多样性急剧降低。认为BS-1菌通过破坏普通大蓟马消化道微生物物种多样性,降低普通大蓟马的免疫力,提升自身侵染的效率和毒力。5.本文通过对生防真菌BS-1剂型研究、与精油提取物的联合使用、对天敌昆虫的影响等内容,探索其投入实际应用的方法与措施。测试了温度对其分生孢子萌发的影响,结果表明25℃为BS-1分生孢子萌发的最适温度。20、30℃对BS-1分生孢子萌发速率和萌发率无明显影响,35℃会轻微减缓分生孢子萌发速率,但对萌发率无明显影响,说明BS-1分生孢子可以成功制成冻干粉和微胶囊等剂型,制成的冻干粉复苏成功率93.33%。微胶囊剂复苏后对普通大蓟马LT50为62.63h。小分子挥发性化合物Lin与BS-1联用时会提高对普通大蓟马的毒力,具有协同增效作用。BS-1对普通大蓟马的天敌东亚小花蝽(Oriussauteri)具有一定毒力,LT50为74.22h,不推荐这两种生物防治措施联合使用。
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