葱白多糖的提取纯化及生物活性研究

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葱(Alliun schoenoprasum L.)是中国的一种很普遍的调味品和蔬菜,属石蒜科葱属,为多年生宿根草本植物。葱白为植物葱的鳞茎,其中含有多糖类物质,但国内外迄今为止尚未开发利用葱白多糖。本文采用热水浸提法提取葱白多糖,优化提取工艺后对其进行分离纯化、结构表征及降血脂功能、抗氧化活性研究。实验主要研究内容如下:(1)通过响应面分析,对热水浸提葱白多糖的工艺进行了优化,考察了提取温度、提取时间、料液比对多糖提取得率的影响。实验结果表明,各因素对多糖提取得率的影响程度由大到小依次为:提取温度>料液比>提取时间,最佳提取工艺条件为:提取温度83.35℃,料液比1:32.7,提取时间2.57h/次。在此最佳工艺条件下提取两次,葱白多糖的提取得率可达15.98%。(2)采用柱前衍生化高效液相色谱法测定了葱白多糖中单糖的组成及摩尔比。结果表明葱白多糖主要由甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)组成,它们的摩尔比约为1:31.5:22.6:5.1。(3)经脱果胶、透析等初步纯化后以Sephadex G-150柱层析为手段进一步纯化,得到两个对称的峰,收集合并第二个较大的峰后采用紫外扫描、高效液相色谱鉴定该组分的多糖为均一组分,再通过高效液相色谱法测定相对分子量约为5195道尔顿。并通过红外和核磁对葱白多糖进行结构表征。(4)通过动物实验研究了葱白多糖对大鼠血脂水平的影响以及对小鼠脂肪肝的预防作用。在研究多糖的降血脂功能试验中,设对照组和葱白多糖低、中、高剂量组(100、200、400mg/kg·BW),连续给大鼠灌胃30天后取尾血,测定血清TC、TG和HDL-C的含量,结果表明,多糖降血脂效果优于血脂康,且高剂量组降血脂效果优于低剂量组;高剂量组对大鼠TG降低显著、对TC降低不显著;各剂量组均对HDL-C升高显著。在研究多糖对小鼠酒精肝预防作用的试验中,设对照组和葱白多糖低、中、高剂量组(剂量同上),连续给小鼠灌胃30天后,测定肝脏MDA、血清TG和GSH的含量,结果表明,多糖对酒精肝预防作用较水飞蓟素弱;高剂量组对TG降低显著、对GSH升高显著;各剂量组均对MDA降低显著。由此看来,葱白多糖对大鼠有降血脂功能,对小鼠的酒精肝预防作用较弱。(5)采用清除·OH(羟基)自由基模型、O2-·(超氧阴离子)自由基模型和DPPH(1,1-二苯基苦基苯肼)自由基模型评价了葱白多糖的抗氧化能力,并与抗坏血酸进行了对比。实验结果表明:葱白多糖具有一定清除·OH自由基、DPPH自由基作用,并与浓度呈一定依赖关系。葱白多糖清除O2·自由基的能力较弱,清除率与多糖浓度的关系不明显。
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