研究背景与目的:高血压导致的血管损伤是一种慢性低度的炎症反应过程,特别是越来越多的研究表明血管外膜细胞炎症反应不仅参与高血压,而且还参与动脉粥样硬化及血管再狭窄等多种血管病变过程。血管外周脂肪组织作为一重要的外膜组成成分,通过分泌多种生物活性物质参与血管生理病理功能的调控。我们之前的研究发现血管外周组织分泌炎症因子参与醋酸去氧皮质酮(DOCA)-盐高血压模型的血管重塑调节。而炎症因子的表达受到多种因素的调节,包括转录水平的调节和转录后水平的调节,其中miRNA是新近来发现的转录后调控因子。外周脂肪组织中miRNA是否参与调控血管炎症仍不清楚。本研究拟在DOCA-盐高血压小鼠模型中发掘血管外周脂肪中与血管炎症相关的miRNA,并研究其功能。研究方法:1.建立DOCA-盐高血压模型:C57雄性小鼠左侧单侧肾切除后,在肩胛骨处皮下埋入DOCA泵并给予高盐饮水,模型建好后通过尾动脉测量血压。苏木素伊红(H&E)染色和免疫荧光染色测定血管外周脂肪组织结构和炎症相关因子的表达。2.芯片筛选各组组织中差异表达miRNA,并通过LNA-RT-PCR方法验证感兴趣的miRNA。3.预测靶基因并通过双荧光素酶报告基因系统验证miRNA和该靶基因的关系。4.靶基因的表达检测及在细胞水平的研究其功能。通过western blot和免疫荧光染色检测靶基因在组织水平的表达;并在细胞中探讨该蛋白对炎症因子的影响。研究结果:1.DOCA-盐模型组小鼠血压显著升高,胸主动脉血管壁增厚,血管外周脂肪组织中细胞变小,单位面积内细胞核数目增加;促炎症细胞因子OPN蛋白增加和F4/80标记的巨噬细胞浸润增加。说明血管外周脂肪组织中发生炎症,其结构发生改变。2.DOCA-盐模型后血管外周脂肪组织(PVAT),肠系膜脂肪组织(MAT)和主动脉血管壁(aorta)中miRNA的表达特征变化各不相同。经过维恩图分析和信号值分析选取let-7b等作为候选miRNA,验证发现let-7b在DOCA-盐组小鼠PVAT中显著下降。3.通过let-7b的靶基因预测及相关分析,筛选出ADRB3可能参与血管炎症过程。4.进一步通过双荧光素酶报告基因系统检测和过表达或抑制let-7b检测ADRB3蛋白水平,证实ADRB3是let-7b的一个靶基因。并且和对照组相比,DOCA-盐小鼠PVAT中let-7b水平显著降低,ADRB3蛋白水平显著升高。5.在脂肪细胞中,血管紧张素II能够显著引起ADRB3和促炎因子OPN表达增加,但是let-7b表达下降的并不明显。ADRB3选择性激动剂CL316243也有类似的作用。然而,let-7b拮抗剂抑制let-7b的表达能够显著升高ADRB3蛋白水平,但是OPN的表达升高并不明显,说明ADRB3的激活引起脂肪细胞中OPN表达增加。结论:在血管外周脂肪组织中,Let-7b能够调节ADRB3蛋白的表达,激活ADRB3引起促炎症因子OPN的表达,提示let-7b可能通过调节ADRB3间接参与血管外膜炎症过程,为let-7b在心血管疾病研究中的新靶点提供了理论依据。