七鳃鳗为圆口纲无颌类脊椎动物,是联系无脊椎动物与脊椎动物间的重要阶元和研究免疫起源和进化的模式动物,在生物的进化和发育过程中具有重要地位。从七鳃鳗血清中分离出的LIP（Lamprey immunity protein）蛋白,经研究发现可以实现对肿瘤细胞的选择性杀伤,因此对其杀伤机制的研究具有重要意义。本论文利用了基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱（MALDI-TOF）、高分辨钠升液相液质联用（LC-MS）以及表面等离子共振（SPR）等技术,对LIP在肿瘤细胞的识别位点进行了研究,通过超高分辨显微成像系统和激光共聚焦显微镜,利用与天然七鳃鳗LIP蛋白活性相似的重组LIP蛋白,基于细胞膜表面系统,结合七鳃鳗LIP的结构特征,推断出LIP对肿瘤细胞的识别位点在细胞脂筏上。我们经研究发现,LIP对磷脂酰肌醇依赖的磷脂酶C（PI-PLC）处理后的肿瘤细胞杀伤消失。说明其结合位点对PI-PLC酶敏感,经过多种实验方法验证,排除了 LIP与GPI-APs核心糖链结合的可能。通过糖芯片实验结果表明LIP与两种含有N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc）的天线型N-糖链具有相互作用。利用BIACORE将N糖苷酶处理后的肿瘤细胞脂筏与LIP进行结合与垂钓实验,得到的样品通过高分辨质谱进行分析,在人的GlycomeDB数据库中匹配到了与糖芯片高度类似的含有Neu5Gc的糖链,证明了 LIP确实可以和肿瘤表面含有Neu5Gc的N糖链相结合。通过高分辨液质联用的分析,发现LIP可能与脂类相结合。通过研究发现,LIP对鞘磷脂水解酶SCDase处理后的肿瘤细胞杀伤力下降,鞘脂中的糖鞘脂和磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine,PC）不影响LIP的杀伤作用。又通过MALDI-TOF-MS验证了 PI-PLC和SCDase都能酶解脂阀外侧的鞘磷脂（SM）,而磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine,PC）不能被SCDase分解。因此LIP与细胞脂筏中的鞘磷脂也有相互作用。通过高分辨钠升液相液质联用,对LIP不敏感的白细胞和对LIP敏感的MCF7细胞进行了脂质组学分析和相应的生物信息学分析。得到了相应细胞表面脂筏的脂类构成。发现从种类上看,白细胞和MCF7细胞上的SM并无区别。又经过研究发现鞘磷脂与LIP呈剂量依赖性方式增强LIP的杀伤活性,且多种肿瘤细胞表面脂筏中的鞘磷脂含量和鞘磷脂合成酶（SMS1,SMS2）的表达量高于正常细胞。通过以上实验,因此肿瘤细胞脂筏微区组分鞘磷脂可能是LIP杀伤肿瘤细胞的识别靶点。这种识别与脂筏微区中的鞘磷脂含量有关,与鞘磷脂种类无关。PI-PLC酶处理后的肿瘤细胞对LIP蛋白的敏感性几乎完全消失,是因为PI-PLC酶同时破坏了脂筏上连接的GPI锚定蛋白,以及脂筏表面的鞘磷脂。即一种酶同时破坏了 LIP蛋白的两个结合位点。本研究确定了肿瘤细胞表面含有特殊Neu5Gc唾液酸的N-糖链及脂筏上的鞘磷脂是LIP识别肿瘤细胞的两个识别靶点。LIP蛋白的N端与GPI锚定蛋白上糖基化修饰的Neu5Gc结合,C端与脂筏上的鞘磷脂结合,是LIP能够快速选择性杀伤肿瘤细胞的关键。两者缺一不可。识别为机制有助于我们更好地开发Neu5Gc这个肿瘤表面特有的唾液酸,以及瘤细胞脂筏微区组分鞘磷脂在肿瘤识别、杀伤和给药等方面的潜力。为抗肿瘤研究提供了一个全新的思路。