实验目的:前期研究发现,活性氧与经络系统之间可能存在着密切的关系,而越来越多的研究表明经络的物质基础是结缔组织,因此本文初步探索了体内结缔组织中活性氧分布以及从细胞水平研究活性氧对结缔组织的作用。实验方法:从细胞、组织与器官,乃至整体动物水平上进行本课题研究。(1)体内实验方法:利用活性氧染色法并结合组织学方法来研究观察动物体内活性氧的分布情况,尤其是根据前期实验结果,选取处于腹壁肌层正中间的腹白线的组织成分、活性氧分布情况以及形态学特征等进行重点研究。(2)体外实验方法:利用体外细胞培养方法,初步探索活性氧对成纤维细胞和肥大细胞的影响、这两种细胞之间以及细胞与胞外基质之间的相互作用。实验结果:体内实验结果:(1)活性氧在各组织器官之间的分布不均匀,针对本实验的研究对象而言,分布最多的为小肠、阴茎与胆管;次之的为肾脏、肝脏;最少的为胰脏、肺。此外,活性氧在组织器官内部的分布也不均匀,并且其分布所在位置基本与结缔组织结构相吻合。(2)腹白线贯穿了腹壁肌层内外两侧,其组成成分包括胶原纤维、肥大细胞和成纤维细胞,并且腹白线上的活性氧就集中在结缔组织上。体外实验结果:(1)低浓度的活性氧对结缔组织中的成纤维细胞与肥大细胞具有促增殖作用,而高浓度具有抑制增殖作用,并且浓度越高抑制越明显;并且这两种类型的细胞对于活性氧的耐受能力不同,后者要强于前者。(2)细胞骨架染色发现成纤维细胞的突起相互连接形成细胞网结构,而活性氧会使成纤维细胞骨架重构从而减少这种连接,甚至破坏骨架结构。(3)过氧化氢导致的成纤维细胞的抑制增殖率越高,细胞骨架的损伤越严重,ATP合成量越低。(4)肥大细胞与成纤维细胞共培养体系发现肥大细胞会促进成纤维细胞的增殖,以及成纤维细胞的树枝状突起的增多。实验结论:初步证实了体内器官组织上结缔组织部位活性氧浓度偏高,尤其腹白线上结缔组织部分,并且活性氧对结缔组织中细胞的生物学活性(细胞骨架、细胞增殖以及ATP合成)具有重大影响。这些结果将有助于解释经络系统中的低阻抗、结节等现象,以及从活性氧的角度阐释经络系统的作用机制,并为下一步构建体外三维结缔组织模型奠定基础。