【摘 要】
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目的:研究人原代脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)共培养,HUVEC与Treg细胞
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目的:研究人原代脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)共培养,HUVEC与Treg细胞相互作用对各自主要炎性细胞因子的影响。方法:用C6/36细胞扩增DENV-2病毒,RT-PCR鉴定病毒,用DENV-2感染HUVECs细胞,Real-Time RT-PCR鉴定被感染HUVECs内病毒NS1片段表达量,以此反映HUVECs感染病毒情况。密度梯度离心法从人浓缩白细胞分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),磁珠阴性分选Treg细胞,流式细胞术检测CD4+CD25+CD1<0.01)后下降。流式细胞术检测经免疫磁珠阴性分选的Treg细胞纯度为84.3±0.5%。DENV-2感染后HUVECs IL-6、IL-8、TNF-αm RNA表达均有上调,感染后24h IL-6 m RNA表达量为31.83±5.24;IL-8 m RNA表达量为26.83±5.81;TNF-α为427low细胞纯度。HUVECs经DENV-2感染后,用Transwell与Treg细胞共培养,对照组用磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate S1P)1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24h后与Treg细胞共培养,Real-time RT-PCR分别检测HUVECs IL-6、IL-8、TNF-α的m RNA和Treg IL-10、TGF-β的m RNA相对表达量;双抗体夹心ELISA法检测培养上清中上述细胞因子表达。结果:感染后HUVECs中DENV-2 NS1基因表达在24h达到峰值(3.03±0.26,P.25±0.94),与Treg共培养后上述细胞因子在各时间点的表达有所降低,但仍高于未感染DENV-2的对照组。CYM-5442预处理被感染的HUVEC IL-6、IL-8、TNF-α的m RNA表达显著下降,与之共培养的Treg细胞所产生的IL-10、TGF-β相较未预处理组也下调。结论:被DENV-2感染的原代HUVECs能增强Treg细胞IL-10与TGF-β的分泌,同时Treg细胞产生的抑制性细胞因子能降低被感染的HUVECs炎性细胞因子的产生。
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