论文部分内容阅读
竹叶黄酮是竹叶中存在的天然活性物质,被证明具有良好的抗氧化、清除活性氧自由基、调节血脂、保护心脑血管、抗癌等药理功能。为了研究竹叶黄酮对CCl4诱导小鼠肝损伤的保护作用及抗氧化机制,采用超声波辅助乙醇提取,优化其提取工艺参数；通过研究AB-8大孔吸附树脂确定最佳纯化条件,高效液相色谱法分离测定竹叶黄酮中成分含量；通过CCl4灌胃建立小鼠肝损伤模型并喂食竹叶黄酮28天,测定各项酶活性并制备肝脏病理学切片,从生物学整体水平研究竹叶黄酮对CCl4诱导肝损伤的保护作用；进行体外细胞实验,测定细胞活性及胞内主要抗氧化酶活,从细胞水平研究竹叶黄酮对化学性肝细胞损伤的保护机理。得到主要研究结果如下：(1)通过单因素实验确定提取影响因素的最佳参数值,正交实验分析进一步优化竹叶黄酮乙醇超声波辅助提取的工艺参数,最终得出最佳的超声提取条件：60%乙醇浓度,60℃超声温度,40min超声时间,1：15料液比。(2)选取大孔树脂AB-8作为竹叶黄酮吸附剂,分析研究其对竹叶黄酮的静态、动态吸附能力,结果表明AB-8吸附量大,易于洗脱,纯化富集效果好,其分离纯化最佳条件为：7h吸附时间,5.5样液pH,60%洗脱剂乙醇浓度,1.0mg/mL样品浓度,1.OmL/min吸附流速,1.5mL/min洗脱流速洗脱。(3)纯化后提取液黄酮含量从9.68%提高至30.21%,纯度提高3.1倍,起到较好的提高有效物质浓度、富集的作用。通过高效液相色谱法(HPLC)分析验证竹叶黄酮成分含量,调节洗脱梯度、流动相等得到较好的分离鉴定竹叶黄酮液相条件,成功分离测定出竹叶黄酮中4种主要黄酮苷元：芦丁、槲皮素、荭草苷、牡荆苷。(4)体内动物实验表明：通过建立CCl4肝损伤动物模型,竹叶黄酮能促使谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)含量显著下降(p<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和肝糖元含量明显升高(p<0.05),并呈剂量依赖性；肝组织切片观察,竹叶黄酮组可显著降低肝损伤组病变程度。(5)体外细胞实验表明：建立CCl4对NCTC-1469小鼠肝细胞损伤模型,CCl4最适浓度和时间选为20mmol/L、6h。此条件下小鼠正常肝细胞存活率50%左右,且AST、ALT活性均显著升高,细胞损伤的程度与CCl4浓度及作用时间呈正相关。竹叶黄酮可显著提高受损细胞存活率及胞内抗氧化酶SOD、CAT活性,降低因细胞损伤引起的AST、ALT及MDA含量的升高(P<0.05),对改善NCTC-1469损伤有明显的效果,且浓度越高其改善肝细胞损伤的效果越显著,证明竹叶黄酮对CCl4诱导的肝细胞损伤有良好保护效果。