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黄曲霉毒素（aflatoxins,AFs）是由黄曲霉菌（A.flavus）等真菌产生的具有强毒性和强致癌性的次级代谢产物。AFs分布广泛,是粮食及其制品中常见的污染物,给食品安全带来了极大的威胁。因此,尽早检测出被A.flavus和AFs污染的食品,对于监测预警、防控和降低AFs的危害具有积极意义。但传统的A.flavus和AFs的检测方法均存在操作复杂、技术和设备要求较高等不足,不能满足快速检测的需要。为更好的控制AFs污染,本文研究建立了食品中A.flavus和黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的快速检测方法。主要研究内容及结果如下:1、建立了粮食中A.flavus的荧光定量PCR检测方法。针对A.flavus的转录间隔区（Internal transcribed spacer,ITS）保守序列、毒素合成关键基因afl R、afl D、afl P分别设计三对引物,通过实验筛选出扩增效果最好的ITSⅠ引物用于荧光定量PCR检测。评估了该方法的特异性和灵敏度,结果显示其具有较高的特异性,可检测出绝大部分的A.flavus,而对其它菌株不产生扩增信号。其检测限为10~6 conidia/g样品,与已报道的使用FLAQ引物的方法相同,可作为日常检测的新选择。2、建立了基于重组酶聚合酶等温扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）的现场化快速检测A.flavus的检测体系。建立了通过洗涤、抽滤、研磨快速提取粮食中A.flavus DNA的方法,使用0.5 M氢氧化钠（Na OH）作为研磨缓冲液,并设计制作了相应的简易工具,可在10 min内完成DNA的富集提取。设计了RPA引物并对RPA扩增体系进行了优化,使得RPA在37℃下10 min即可完成。同时选择了CelfinderTM核酸染料对扩增产物进行可视化检测。所建立的RPA检测体系可实现在30 min内对粮食中A.flavus污染的高灵敏度检测,其灵敏度可达10~1 conidia/g样品,其实际应用情况也得到了验证。且整个检测过程不需要大型仪器设备,只需一些便携的工具即可完成,非常适合基层等实验条件不足的单位开展粮食A.flavus污染情况的筛查,对于监测预警和控制A.flavus污染在粮食中传播,降低AFs对人类的危害具有积极地意义。3、探索设计并建立了一种用于检测AFB1的基于CRISPR-Cas14a的适配体传感器模型。首先,成功建立并优化了基于CRISPR-Cas14a系统的单链DNA（single-stranded DNA,ss DNA）检测体系,该体系可在短时间内实现对ss DNA的高灵敏度检测,检测限低至0.5 n M,进一步证明了CRISPR-Cas14a系统在ss DNA检测方面的可行性。其次,探究了该检测模型的可行性,经研究该传感器在AFB1存在时可产生信号响应,虽然经过初步优化,该适配体传感器灵敏度仍较低,在实际样品的检测中只能用于AFB1含量在100 ng/m L以上的样品检测,还不具有实际应用价值。但该检测模型首次将CRISPR-Cas14a系统与适配体相结合,将CRISPR的检测范围由核酸靶标拓展为小分子物质靶标,对新检测方法的开发具有积极意义。同时,目前正在通过对适配体及其互补序列的优化来提高其检测灵敏度。